Rata de flujo de aire en el perímetro de trabajo. Es bueno anotar que el test de humo es un indicador de flujo de la dirección del aire, no de su velocidad.
Test de integridad del filtro HEPA.
Prueba de presión. Es para determinar fuga en la estructura de la cabina. Se debe realizar durante la instalación inicial, después de ser movida de posición y/o después de reparación o cambio de filtros.
El test de seguridad, se realiza para verificar potenciales peligros en el sistema eléctrico, polaridad, interruptores y resistencia de circuitos a tierra.
Test de la intensidad de la luz durante la operación de la cabina.
Test de vibración de la cabina.
Test de ruido de la cabina. Estos últimos test, sirven para evitar fatiga en el operario.
Test de la lámpara ultravioleta (UV). El método es como sigue :
Encender la lámpara ultravioleta por 5 minutos.
Colocar el sensor de medición de UV en el centro de la mesa de trabajo.
La radiación medida no debe ser menor de 40 microwatts por cm² a 254 nanometros (nm).
d) Incinerador:
a) En condiciones normales el incinerador logra la temperatura óptima de esterilización (81.5 °C) 10 minutos después de haber sido encendido.
b) Bastan 5 segundos para lograr la destrucción de bacterias, hongos y micobacterias.
c) No es necesario observar incandescencia en el asa para lograr la esterilización.
d) Inspeccione la cerámica del incinerador por rajaduras.
e) Aleje el incinerador de elementos que puedan incendiarse por el calor generado.
e) Generadores de ambiente ( Sistema GasPak®) :
a) Mantenga los generadores de gas a temperatura ambiente y el sobre sellado.
b) Mantenga los catalizadores en lugar seco, a temperatura ambiente y las bolsas sellados.
c) Mantenga los indicadores de anaerobiosis a temperatura de refrigeración
(2-8°C).
d) El tiempo de generación de la atmósfera dentro de la jarra es de 30 minutos.
e) El indicador de anaerobiosis cambia de color azul a blanco dentro de la jarra en 4 a 5 horas.
f) Una evidencia sugestiva de ambiente anaerobio, es el cambio de color a rojo vino del agar sangre.
g) Algunos microbiólogos utilizan un agar inoculado con Clostridium novyi B
(ATCC 19402) como indicador de ambiente anaerobio, ya que el mismo es anaerobio estricto.
h) Los catalizadores de Paladio, pueden ser regenerados colocándolos en horno a 160 °C por 2 horas. Guardar los pellets en envase cerrado.
i) Control biológico de crecimiento:
f) Refrigeradoras:
a) Control diario de la temperatura en hoja de formato mensual.
b) Coloque los platos Petri en posición invertida con la tapa hacia abajo.
c) Mantenga la temperatura entre 4 – 8 ° C.
d) Utilice refrigeradoras que no hacen escarcha.
e) No coloque medios de cultivo aún ligeramente calientes dentro de la refrigeradora.
f) Evite abrir con frecuencia la puerta de la refrigeradora.
g) Lleve un registro de problemas de funcionamiento, causa y solución.
h) No guarde alimentos en refrigeradoras para especímenes clínicos.
g) Microscopios:
h) Centrífugas:
Problemas y Limitaciones:
Vibración
Chequear por balance apropiado.
Chequear tamaño de los tubos.
Mirar si la centrífuga está sobre una superficie plana.
Rotura
Chequear tamaño de los tubos.
Balance correcto.
Verificar el interior de los portatubos
Desprendimiento de tapas:
a) Utilice tapas de rosca.
b) Si no es posible, use Parafilm sobre los tapones de caucho.
c) Siempre que sea posible utilice tubos de plástico.
4) No centrifuge grandes volúmenes de líquidos inflamables, los cuales pueden
producir vapores que pueden incendiarse durante la operación del equipo.
d) La concentración de materiales infecciosos para cultivo puede realizarse en el área rutinaria de cultivo, siempre y cuando los tubos estén bien cerrados.
e) No colocar las tazas o los portatubos en el horno o autoclave para descontaminar.
f) Evitar utilizar para la limpieza soluciones que contengan cloro o sal, ya que son altamente corrosivas.
Control de calidad de equipos automatizados
El laboratorio de microbiología moderno se auxilia de equipos computarizados para ayudar en la rapidez y precisión del diagnóstico etiológico. En la sección de Microbiología del Laboratorio Clínico del C.H.M,Dr. A.A. Madrid contamos hasta la fecha de 4 sistemas computarizados: BacT/Alert y Bactec para los hemocultivos, Vitek System para la identificación y antibiogramas y el Bactec MGIT 960 para la detección de micobacterias.
Cada uno de éstos equipos, consta de sus propios sistemas para el control de calidad. A continuación presentamos algunas observaciones relativas al control de calidad de los referidos equipos:
a) BacT/Alert ®:
El sistema BacT/Alert es utilizado para la detección temprana de microorganismos en hemocultivos u otros fluidos corporales. El sistema utiliza un sensor colorimétrico y una luz reflejada para monitorear la presencia y producción de CO2 disuelto en el medio de cultivo. Si existen microorganismos en la muestra, se genera CO2 cuando los microorganismos metabolizan los substratos del medio de cultivo. Si el crecimiento de los microorganismos genera CO2, el color del sensor gas-permeable instalado en el fondo de cada frasco de cultivo cambia de verde a amarillo.
Cada equipo trae consigo un kit de reflectancia estándar para los procedimientos de control de calidad y de calibración. Además, de un software para ayudar en pantalla a realizar el mismo. A parte de esto, cada lote de frascos de cultivo es suministrado con un Certificado de Análisis de control de calidad de fábrica.
El BacT/Alert utiliza 3 determinantes de control de calidad: Control de calidad de las celdas, Calibración de las celdas y Calibración de la temperatura del equipo.
La opción Control de Calidad de las Celdas es utilizada para asegurar que las celdas del instrumento están en su óptima capacidad de detección. Este control debe ser parte del mantenimiento normal del sistema. Un kit estándar de reflectancia es proporcionado con cada instrumento para los procesos de control de calidad y calibración. Son dos estándares de reflectancia en cada kit, sin embargo, el proceso de control de calidad solo utiliza el estándar de reflectancia B. El anillo al final de los estándares identifica su número estándar de reflectancia. Cuando el control de calidad de una celda falla y no es recalibrada, ésta automáticamente es inactivada.
Generalmente el periodo de control de calidad para cada celda está configurado en 30 días en base al menú Editar Configuración del Sistema del capítulo Mantenimiento de Funciones del Sistema. Este control solo se puede realizar en celdas vacías. Al final de que todas las celdas han sido evaluadas, puede obtenerse por impresión un reporte del estado de las Celdas, luego de lo cual el instrumento retorna automáticamente al menú Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opción Calibración de Celdas, es utilizada para recalibrar cualquier celda que haya fallado el control de calidad. El kit viene con dos estándares de reflectancia. El procedimiento utiliza ambos. El instrumento automáticamente recalibra la celda una vez se ha introducido el estándar cuando lo indique el instrumento. Si la calibración de la celda falla, el instrumento automáticamente inactiva la celda. Al final se puede obtener un reporte del estado del instrumento y la pantalla retorna automáticamente al menú de Funciones de Mantenimiento del Instrumento.
La opción Calibración de la Temperatura, es utilizada para calibrar la temperatura dentro del instrumento. Primero se mide la temperatura interna del instrumento utilizando el proceso descrito en Verificación de la Temperatura del capítulo Mantenimiento Preventivo. Solo utilice ésta opción si hay discrepancia entre la temperatura marcada por el equipo y la temperatura óptima preestablecida.
En el Menú principal ir a Otras Funciones BacT/Alert.
Mantenimiento del Instrumento.
a1) Control de calidad.
b1) Control de calidad de celdas.
c1) Lista de Celdas
d1) Seleccionar la tecla F9
f1) Introducir los estándares de calibración de celdas siguiendo las
instrucciones de la pantalla.
a2) Calibrar celdas.
b2) Quiere calibrar la celda "x "
c2) Si
d2) Introducir el estándar I en la celda "x"
a3) Calibrar temperatura
b3) Seleccionar y ajustar la temperatura del equipo.
Observaciones y Limitaciones del Test:
1) En cada frasco se debe anotar su número de laboratorio y la casilla asignada.
2) Colocar los frascos hasta el fondo de la celda.
3) No aerear los frascos anaerobios.
4) Todo frasco con frotis negativo, debe ser colocado nuevamente en el aparato.
5) Ciertas variantes de H. influenzae, N. Meningitidis, N. Gonorrhoeae y
P. anaerobius, pueden ser sensibles al anticoagulante ( SPS ) lo que resulta en una falta de crecimiento o baja producción de CO2.
6) En el caso de cultivo de otros fluidos corporales, se requiere agregar sangre
u otro suplemento al frasco si se intenta recuperar organismos tales como H. influenzae y N. gonorrhoeae.
7) En contadas ocasiones pueden presentarse BacT/Alert positivos, con frotis y subcultivos negativos, debido a una excesiva cantidad de glóbulos blancos en la muestra de sangre.
8) Se recomienda quitar del aparato, aquellos frascos considerados positivos por el BacT/Alert, para evitar cultivos no viables debido a autolisis, especialmente en microorganismos fastidiosos como el S. pneumoniae.
b) BACTEC 9240 ®:
El sistema Bactec 9240 es utilizado para la detección temprana de microorganismos en hemocultivos por el método de la fluorescencia.
Cada frasco contiene un sensor que puede detectar aumentos del CO2 producido por el crecimiento de los microorganismos. Cada 10 minutos el instrumento verifica el aumento de la fluorescencia del sensor, la que se relaciona con la cantidad de CO2 presente.
Observaciones y limitaciones del test:
1. No utilice frascos con signos evidentes de deterioro.
No utilice frascos de cultivo después de la fecha de caducidad.
Los frascos inoculados deben ponerse en el instrumento tan pronto como sea posible.
Si se ha tardado en colocar un frasco inoculado en el instrumento, y se puede ver crecimiento, el frasco no debe colocarse en el instrumento, sino subcultivarse y hacer placa por Gram, considerándolo como un frasco presuntamente positivo.
Se recomienda analizar el rendimiento de cada lote de frascos recibidos, utilizando un control positivo y uno negativo. El frasco positivo debe inocularse con 1.0 ml de una suspensión de E. coli o S. aureus con un estándar McFarland de 0.5.
El control negativo está constituido por un frasco sin inocular.
Dado que la sangre puede neutralizar la acción tóxica del anticoagulante SPS
sobre algunas Neiserias y cocos Grampositivos anaerobios, se recomienda utilizar volúmenes de sangre no menores a 1.0 ml para facilitar el crecimiento.
Ciertos organismos exigentes como el H. influenzae requieren para su crecimiento de elementos que se encuentran en la sangre como el factor V. Si la muestra de sangre es reducida, es posible que se requiera agregar éstos suplementos al frasco si se sospecha de éstos microorganismos.
Puede darse casos de falso positivo en pacientes con un conteo de leucocitos muy elevado.
c) Sistema Vitek ®:
El control de calidad, es un subsistema del Vitek, que examina la seguridad de sus tarjetas. El control de calidad opera similarmente a la evaluación de exámenes clínicos: El test clínico identifica el organismo, el examen de control de calidad valida el test.
Realizar control de calidad a toda nueva tarjeta de identificación o de sensibilidad, una vez se ha recibido en el laboratorio. No se requiere ningún otro control de calidad si todos los resultados están dentro de los límites esperados. Realizar control de calidad por 5 días consecutivos si se observan resultados fuera de control.
INTERFERENCIAS:
No utilice tarjetas Viek vencidas debido a que pueden causar resultados con lectura errónea.
El mantenimiento inapropiado de las cepas control, subcultivos y mal llenado de las tarjetas, puede resultar en inconsistencias o bipatrones erróneos.
ALMACENAMIENTO DE LAS TARJETAS:
Las tarjetas Vitek deben ser mantenidas a 2 – 5 ºC. Si la temperatura de las tarjetas está comprometida, las tarjetas deben ser descartadas.
Consideraciones específicas:
1. El programa de control de calidad evalúa el kit del Vitek y los organismos de control de calidad listados en el paquete.
2. Las tarjetas de control de calidad utilizan 7 dígitos ( formato : 000000-0 ) compuestos de 2 partes:
Los primeros 6 dígitos identifican el tipo de tarjeta y un organismo ATCC.
El séptimo dígito identifica el número de lote y es asignado automáticamente.
3. Cada número predefinido de referencia en el control de calidad significa un tipo de test y un organismo. Un número de referencia de control de calidad es más que un número de identificación de tarjeta. Cada uno de éstos números significa la paridad de un tipo de tarjeta con un organismo. Así por ejemplo el número de referencia 900101 corresponde al Proteus mirabilis ( ATCC 7002 ) y el 900102 a la Ps. aeruginosa ( ATCC 27853 ).
4. Un campo para control de calidad demográfico está accesible para la información del lote de la tarjeta.
5. El control de calidad provee su propio set especial de reporte.
6. El flujo de operación del control de calidad es idéntico al flujo de una muestra clínica.
7. Los resultados de control de calidad se transfieren de la incubadora/lector a la base de datos, si la opción de transferir la tarjeta finalizada está activa.
8. Todos los resultados se mueven a través del manejador de desviaciones del control de calidad, el cual compara los resultados actuales con los conocidos.
9. El programa de control de calidad Vitek permite ver los resultados del control en pantalla., los cuales aparecen en 3 diferentes formatos: Resultado de la identificación, resultado de la sensibilidad a los antibióticos y resultado de la identificación de urocultivos. La pantalla nos indica :
La identificación del organismo esperado ( ATCC ).
Resultado de la identificación actual.
Lote de la tarjeta.
Fecha del test.
Fecha de expiración de la tarjeta.
Reacciones bioquímicas esperadas y de la prueba actual. Cada uno de los test bioquímicos son señalados tanto en lo esperado como en el resultado actual, y se genera una lista de los test que se han desviado del resultado esperado.
Igual patrón al anterior muestra la tarjeta de sensibilidad a los antibióticos.
Todos los resultados de control de calidad pueden ser impresos guardar en un libro récord.
10. La base de datos de los equipos de identificación computarizados, deben ser frecuentemente revisados para actualizarlo en lo referente a los cambios taxonómicos que ocurran. Igualmente se debe prestar atención a la información proveniente de la casa manufacturera acerca del producto y las investigaciones que con el equipo aparezcan en la literatura especializada.
11. Los informes de control de calidad y reporte de desviaciones, son mantenidos en el Libro de control de calidad del Vitek.
12. El sistema Vitek también cuenta con un programa que ayuda a evaluar los resultados, minimizando los errores de interpretación. Se trata del bioMérieux Vitek Expert System. Los sistemas expertos se basa en marcadores fenotípicos y el uso de categorías de susceptibilidad ya definidas, que interpretan los resultados basados en criterios locales y mundiales. El sistema experto trabaja con una selección determinada de antibióticos e implica la alimentación de bases de datos donde los géneros y especies bacterianas se agrupan en fenotipos caracterizados por un perfil global de susceptibilidad producto de mecanismos intrínsecos y extrínsecos de resistencia a través de los cuales se optimiza la identificación y el informe microbiológico. Estas bases de datos se construyen
amparadas en un extenso conocimiento de las distribuciones de las concentración inhibitorias mínimas (CIM) a numerosos antibióticos y los fenotipos caracterizados dentro de cada especie bacteriana. Cuando un perfil fenotípico se valida se está comparando ese perfil específico contra los perfiles de las bases de datos, permitiendo deducir resultados de los fenotipos observados, corregir resultados y finalmente, realizar recomendaciones sobre las bases de un consenso general y de acuerdo con los parámetros internacionales que se adopten. El sistema experto ayuda a realizar un control de calidad de los resultados de laboratorio pues encuentra resultados inusuales y plantea, mediante alarmas, las correcciones o verificaciones oportunas. El programa puede detectar:
Identificaciones que son inconsistente con los resultados de sensibilidad.
Errores técnicos
Fenotipos raros o improbables.
Expresiones de resistencia incompleta.
Resistencia cruzada.
13. El sistema también permite la adición de reglas ( CAR ) en la que se establecen parámetros que debe cumplir el reporte antes de su impresión.
14. El nuevo sistema informático COPERNICO, permite integrar los equipos Vitek, BacT/ALERT y mini API, para transformar la data analítica en valores clínicamente útiles. El Programa trata de superar las limitaciones del Sistema Informático del laboratorio ( LIS ) en el campo de la microbiología.
i ) Cepas ATCC recomendadas para control de calidad de tarjetas de identificación y sensibilidad con métodos automatizados :
BioMerieux Vitek® Tarjeta para identificación de Gram Negativos (GNI) QC Set
Acinetobacter baumannii ATCC® 19606Bordetella bronchiseptica ATCC® 10580Klebsiella pneumoniae ATCC® 13883Proteus mirabilis ATCC® 7002Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853Serratia odorifera ATCC® 33077Yersinia kristensenii ATCC® 33639
BioMerieux Vitek® Tarjeta para identificación de Gram Positivos (GPI) QC Set
Enterococcus durans ATCC® 6056Enterococcus faecalis ATCC® 29212Erysipelothrix rhusiopathiae ATCC® 19414Staphylococcus xylosus ATCC® 29971Streptococcus bovis ATCC® 9809Streptococcus equi ATCC® 9528Streptococcus pyogenes ATCC® 19615
BioMerieux Vitek® Tarjetas para sensibilidad de Gram Negativos (GNS) QC Set
Enterococcus faecalis ATCC® 29212Escherichia coli ATCC® 25922Escherichia coli ATCC® 35218Pseudomonas aeruginosa ATCC® 27853
BioMerieux Vitek® Tarjetas para sensibilidad de Gram Positivos (GPS) QC Set
Enterococcus faecalis ATCC® 29212
Enterococcus faecalis ATCC® 51299Escherichia coli ATCC® 35218Staphylococcus aureus ATCC® 29213201-126
BioMerieux Vitek® Levaduras (YBC) QC Set
Cryptococcus humicolus ATCC® 9949Candida albicans ATCC® 14053Cryptococcus albidus ATCC® 34140Yarrowia lipolytica ATCC® 9773
d) Sistema Bactec MGIT 960 ® :
El sistema Bactec MGIT 960 es utilizado para la detección temprana de micobacterias en especimenes clínicos. El control de calidad del instrumento es automático y está activo continuamente para asegurar la operación confiable del sistema.
El reporte de control de calidad suministra una lista del estado de todos los detectores del instrumento con la fecha y hora de la última verificación, e incluso la lista de las celdas bloqueadas, temperatura de cada incubadora, estado de los sensores, etc.
Control diario del Equipo:
Verificar la operación de las gavetas/incubadoras y las lámparas indicadoras de estación.
Realizar test de las luces LED indicadoras ( Verde y Roja ).
Chequear el termómetro apretando el botón de test.
Cada vez que se recibe un lote nuevo de tubos MGIT , se sugiere control de
calidad de cepas ATCC en caldo Middlebrook 7H9.
Control de Calidad Negativo:
Utilice un frasco MGIT con solución descontaminante MycoPrep kit y PANTA ( Mezcla antimicrobiana ). colóquelo en la incubadora/detector.
Colocar un frasco de MGIT sin muestra y sin descontaminante y colóquelo en la incubadora/detector.
Inocule una suspensión de E. coli dentro de un tubo MGIT y colóquelo dentro de la incubadora/detector.
Control de Calidad Positivo:
a. Inocule un frasco de MGIT con una cepa control doméstica de Mycobacterium tuberculosis o una cepa control de M. Tuberculosis ATCC 25177 o M. Intracellulare ATCC 13950 y colóquelo en la incubadora.
b. Es importante comprobar que el agua, reactivos de tinción, suplementos, etc, están libres de contaminación por micobacterias ambientales especialmente M. Gordonae y M. Terrae.
Control de calidad en mycobacteriología
El programa de aseguramiento de la calidad en Mycobacteriología, consta de tres componentes: confirmación diagnóstica, rondas de evaluación externa del desempeño e inspecciones de calidad.
La confirmación diagnóstica y las rondas de evaluación externas del desempeño evalúan al personal que realiza y tiñe los frotis y al microscopista que reporta los resultados. Esto constituye la piedra angular de la Red de laboratorios contra la tuberculosis. La primera modalidad permite conocer los resultados del trabajo diario del laboratorio; la segunda modalidad evalúa al microscopista que reporta y aporta información sobre el desempeño de toda la Red. En éste sentido, el control de calidad se inicia con una adecuada muestra, y el resto del trabajo a realizar depende directamente de ésta etapa inicial.
Las inspecciones de calidad permiten conocer el entorno en el que se desenvuelve el microbiólogo, el cual influye directamente en la calidad del trabajo efectuado. Por lo tanto, los tres componentes de este programa son complementarios y conjuntamente brindan una visión integral de la calidad del laboratorio en el diagnóstico de la tuberculosis.
Los indicadores de calidad son los porcentajes de falsos positivos y negativos de donde se deriva la sensibilidad y especificidad, el valor predictivo positivo y negativo y la concordancia. Recomendamos el seguimiento del protocolo de trabajo de la Red Nacional.
Por otro lado, los nuevos métodos de amplificación del ADN para detectar m. tuberculosis, se han incrementado como un arma más del laboratorio en su diagnóstico. Sin embargo, la sensibilidad y especificidad de éstas pruebas ha sido cuestionada, como la falta de reactivos estándar para su control de calidad, por lo que se recomienda tomar las medidas de control requeridas.
Control de calidad en micología
El Control de calidad en micología a tomado gran impulso gracias entre otras cosas, por el interés de las empresa productoras de materiales de laboratorio, por incursionar en un campo aún en desarrollo. Asi como ejemplo, las siguientes marcas realizan esfuerzos en métodos para antifungigramas :
Sensititree ( Izasa )
Fungitest ( BioRad )
ATB-Fungus ( Biomerieux )
Candifast ( Oxoid )
E-Test
Algunas cepas control ATCC para micología son :
C. albicans ATCC 14053
C. albicans ATCC 60193
C. albicans ATCC 90028
C. tropicales ATCC 66029
C. parapsilosis ATCC 22019
C. krusei ATCC 6258
Aspergillus Níger ATCC 10428
C. glabrata DMS 70614
Mucor racemosus ATCC 42647
Penicilium commune ATCC 10428
Saccharomyces cereviseaea ATCC 9763
Geotrichum candidum DMS 1240
Microsporum gallinae ATCC 12108
a) Control de calidad de tinciones en micología :
Tinta China
Cryptococcus albidus : Presencia de cápsula
C. albicans : Negativo por cápsula
b) Hidróxiodo de potasio
Combinar con una muestra de esputo para confirmar que se disuelve
c) Lactofenol – azul de algodón
Penicillium sp : Se observa la pared celular de azul intenso
d) Calcoflúor
Candida albicans : Color azul brillante o verde
Control negativo : KOH mezclado con el blanco del calcoflúor
b) Control de calidad de procedimientos de identificación en micología :
a) Tubos germinales
Candida albicans ATCC 60193 : Control positivo. Tubos germinativos.
Candida tropicales ATCC 66029 : Control negativo. Ausencia de tubos germinativos
b) Perforación de cabello
Trichophyton mentagrophytes : Control positivo. Perforación del cabello
Trychophiton rubrum : Control negativo. Ausencia de perforación
c) Conversión dimórfica
Histoplasma capsulatum : Crecimiento/conversión a levadura
Sin inóculo : No crecimiento
d) Termotolerancia
Aspergillus fumigatus : Control positivo. Crecimiento a 45-50°C
Aspergillus flavus : Control negativo. Ausencia de crecimiento
c) Control de calidad de pruebas bioquímicas en micología :
Levaduras – Asimilación de carbohidratos
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231 No crecimiento
Celobiosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Galactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Glucosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Inositol Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Lactosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Maltosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Sucrosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Trehalosa Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Crecimiento
Candida krusei ATCC 6258 No crecimiento
Levaduras – Fermentación de carbohidratos
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Control ( Libre ) Candida albicans ATCC 10231 Negativo. No gas
Celobiosa Candida lusitaneae ATCC 34449 Positivo. Gas.
Galactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No gas
Glucosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No gas
Lactosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No gas
Maltosa Candida albicans ATCC 10231 Positivo. Gas
Candida kefyr ATCC 2512 Negativo. No gas
Sucrosa Candida kefyr ATCC 2512 Positivo. Gas
Candida krusei ATCC 6258 Negativo. No gas
Trehalosa Candida tropicales ATCC 13803 Positivo. Gas
Cryptococcus laurentii ATCC 18803 Negativo. No gas
d) Control de calidad de medios de cultivo en micología :
MEDIO ORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Agar extracto de arroz Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento. Clamydosporas
Candida krusei ATCC 6258 Crecimiento.
No clamydosporas
Urea de Christensen Cryptococcus neoformans ATCC 66031 Positivo. Rosado
Candida albicans ATCC 60193 Ausencia de color
Agar dermatofitos Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 Crecimiento.
Rojo.
Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento escaso
Aspergillus Níger ATCC 16404 Inhibición
Sabouraud dextrosa agar Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento
Mycosel Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento
e) Control de calidad de pruebas comerciales de identificación en micología :
PRUEBA MICROORGANISMO RESULTADO ESPERADO
Vitek ID-YST® Candida tropicales ATCC 201380 Identificación correcta
Candida kefyr ATCC 4135
Candida magnoliae ATCC 201379
Candida membranaefaciens ATCC 201377
Trichosporon mucoide ATCC 201382
API ID 32C® Candida glabrata ATCC 64677 Identificación correcta
Candida guillermondii ATCC 6260
Cryptococcus humicola ATCC 64676
Candida krusei ATCC 6258
BactiCard Candida® Candida albicans ATCC 10231 Identificación correcta
Cryptococcus neoformans ATCC 32045
RapID Yeast Plus System® Candida kegyr ATCC 2512 Identificación correcta
Candida glabrata ATCC 2001
MicroScan Rapid Yeast ID® Candida albicans ATCC 66027 Identificación correcta
Candida tropicalis ATCC 66029
Cryptococcus albidus ATCC 66030
Cryptococcus neoformans ATCC 66031
Candida glabrata ATCC 66032
Cryptococcus unigutulatus ATCC 66033
Control de calidad de fórmulas lácteas y mamaderas
El control de calidad de las fórmulas lácteas y mamaderas se realiza como un servicio al Departamento de Neonatología del hospital. Básicamente éste control consiste en un recuento bacteriano de bacterias mesófilas y recuento de bacilos coliformes.
Consideraciones referentes al control de calidad:
Mantener control sobre la esterilidad de los platos Petri y las pipetas.
Si al calentar los tubos para diluir el agar base o el Red Bile presentaran turbidez, descartar ya que es signo de contaminación del medio.
Es preferible no mezclar por inversión la leche para homogenizar, ya que se puede salpicar la parte interna de las mamaderas y si hubiera contaminación de la leche, ésta se puede extender a la mamadera.
Servir 1.0 ml de la leche en un frasco con 50 ml de fosfato dipotásico estéril para hacer una dilución 1:100. Traspasar 1.0 ml de la dilución a 2 platos Petri.
Traspasar el mamón a un frasco con fosfato dipotásico estéril. Mezclar. Traspasar 1.0 ml de la dilución a cada uno de 2 platos Petri esteriles.
Evitar servir los medios muy calientes al plato Petri con la muestra, ya que se pueden matar los gérmenes potenciales. Una temperatura de aproximadamente 30-40 °C es apropiada, sin dejar coagular el agar.
Mezclar homogéneamente el agar y la muestra rotando el plato y sin permitir la formación de coágulos.
Incubar a 35ªC por 24 horas. Al final de la incubación se realiza la lectura, en la que si hay colonias en la fórmula, se deben contar las colonias y multiplicar por 100. En el caso del mamón, las colonias se multiplican por 50.
Las fórmulas lácteas solo pueden guardarse en refrigeración por un máximo de 48 horas antes de ser procesadas.
En condiciones normales la leche y las mamaderas deben ser estériles.
Si repetitivamente se observa contaminación de la leche, solicitar a las nutricionistas encargadas de la supervisión de la preparación de las fórmulas, una muestra de leche en polvo para un cultivo directo y una muestra de agua, si fuera necesario.
NOTA: Solo como referencia se describen los grados de leche pasteurizada
establecidos en Panamá, mediante el decreto # 522 de 1957
Grado A : No debe exceder de 30,000 col/ ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
Grado B: No debe exceder de 50,000 col/ml.
Recuento de coliformes no mayor de 10 col/ml.
NOTA : Recomendamos utilizar este método como base si se requiere hacer control de calidad de Componentes de Nutrición Enteral, para pacientes incapacitados de recibir sus requerimientos nutricionales por vía oral.
Ref. Calidad microbiológica de una fórmula entera lista para usar.
Rev. Chil. Infect.Vol.21, No.4, Dic 2004.
Control de calidad del agua destilada
El agua destilada utilizada en la preparación de medios de cultivos y para reconstituir reactivos, debe tener un control de calidad básico que incluye los parámetros químicos y bacterianos. A continuación se describe un método cualitativo y muy práctico para su evaluación.
Control de Calidad Químico :
Este control puede ser realizado teniendo en cuenta una gran variedad de parámetros a evaluar, tales como :
Ph
Conductividad
Olor
Color aparente
Turbidez
Alcalinidad
Dióxido de carbono
Dureza
Iones
Cationes
Metales pesados
Sin embargo, dadas las limitaciones para realizar un estudio profundo, recomendamos el siguiente método sencillo y apropiado para determinar la calidad del agua, aparte de la determinación de su Ph ( 5.0 – 5.5 ).
Reactivos:
a) Solución Acuosa de Nitrato de plata ( NO3Ag )
NO3Ag ……… 5.1 g
Agua destilada ………… 300 ml
b) Acido Nítrico
Método:
Colocar en un vaso químico limpio :
10 ml de agua destilada a examinar
2 gotas de ácido nítrico
1 ml de Solución de NO3Ag
Evaluación:
El agua deberá continuar completamente clara. Si aparece una ligera turbidez blanquecina, indicará que la calidad es deficiente.
Ref: manual de Técnicas Básicas OPS/OMS N° 439, pag. 58
Control de Calidad Microbiológico del Agua destilada:
1) Agregar 1 ml de agua destilada a examinar, a un tubo de Tioglicolato.
2) Agregar 1 ml de agua destilada a examinar a un plato de agar sangre.
3) Incubar a 35.5 °C por 4 días.
4) Llevar un libro récord del control de calidad del agua.
Control de calidad de la sangre de carnero
Al ser recibida la sangre de carnero, se debe anotar los siguientes datos :
Fecha de recibo
Fecha de colección
Fecha de expiración
Número de lote
Aspecto ( Ej. Si hay evidencia de hemólisis ).
Hematocrito
Cada botella de sangre de carnero, debe ser evaluada por esterilidad. Para ello recomendamos utilizar botellas de hemocultivos del Sistema Bactec o el BacT/Alert.
Identificar la botella con el número del lote de la sangre
Con una jeringuilla obtener 2.5 ml de la botella o bolsa con sangre de manera aséptica y colocarla en la botella de hemocultivo.
Colocarla en el sistema automatizado inmediatamente.
La botella o bolsa origina de sangre ha de ser colocada en refrigeración de inmediato.
Después de su uso durante la preparación del medio, una pocas gotas de sangre son colocadas en un plato de agar sangre e incubadas por 48 horas a 35ºC , para determinar contaminación durante la manipulación.
Los resultados de control de calidad de cada lote de sangre son guardados para llevar control de la calidad de sangre proporcionada por el proveedor.
A- EL CEPARIO :
Los sistemas de Validación son los procesos que se requieren para asegurar que los parámetros de funcionamiento de los test, tanto comerciales como los de uso domésticos, son los esperados y las pruebas pueden ser utilizadas como métodos de diagnóstico en el laboratorio. La mayoría de los procedimientos en Microbiología Clínica, dependen de que los microorganismos viables en el cultivo sean capaces de mantener sus características morfológicas , fisiológicas y que sean típicas y reproducibles. Para ayudar en este control, las Cepas Estándar de Control de Calidad, son un componente esencial de un proceso de validación.
Existen varias colecciones de cepas utilizables para el control de calidad. Algunos ejemplos son:
ATCC : American Type Culture Collection- Rockville, USA
NCIC : National Collection of Industrial Bacteria- Survey, Inglaterra
JFCC: Japanese Federation of Culture Collection of Microorganism- Japón
CCTM : Colección Nacional – Lille, Francia
RIA: USSR Reseach Institute for Antibiotics- Moscú, Rusia.
NCIB : Colección Nacional industrial – Aberdeen, Escocia
DSM : Deutsche Sammlung von Mikroorganismen – Gottinger, Alemania.
Así, la E. coli ATCC 25922 es igual a la DSM 1103 y a la NCIB 12210.
Los organismos que han de ser utilizados en el control de equipos o sistemas de identificación, generalmente son estipulados por los fabricantes o bien escogidos por el
usuario. Generalmente se utilizan cepas de referencia como las ATCC y si son cepas domésticas, es necesario tener un historial del organismo que incluye nombre, área de aislamiento, reacciones bioquímicas y patrón de sensibilidad a los antibióticos, forma de almacenaje, fecha de último transplante, etc
En todo caso, las cepas de referencia deben tener requisitos específicos:
Características típicas.
Características estables.
Reproducibilidad
1. Métodos de Conservación de Cepas Bacterianas:
Los métodos de conservación de las cepas estándar de control de calidad, deben asegurar que las mismas mantengan sus características típicas y que puedan ser reproducidas después. El medio utilizado para su conservación debe mantener un mínimo de mutaciones. Estas mutaciones pueden evitarse permitiendo también el mínimo crecimiento del microorganismo y aportando óptimas condiciones ambientales para su sobrevivencia, con el menor número de subcultivos
Para una mejor clasificación de los métodos de conservación de cepas, los dividiremos en tres categorías: Cultivos Stock, Semistock y Cultivos de Trabajo.
a) Cultivos Stock:
Estos representan el verdadero " Banco de Cultivos" . Estos son mantenidos en un sistema cerrado de conservación, minimizando su actividad genética y fisiológica,
para evitar su potencial mutación. Los dos más importantes métodos para conservación en Stock, son la Liofilización y el Ultracongelamiento.
LIOFILIZACION: Se hace una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven en leche estéril o similar, y se coloca en tubos con rosca y se siguen las instrucciones del aparato liofilizador, que puede ser tan sencillo como un simple bomba de vacío, hasta un sofisticado sistema. Durante este proceso evitar que el cultivo se derrame dentro el aparato liofilizador y la formación de aerosoles
Este sistema tiene la ventaja de ser el que permite la sobrevivencia por un mayor periodo de tiempo y mayores facilidades para el transporte de las cepas.
ULTRACONGELAMIETO: Hacer una suspensión fuerte de la colonia pura en caldo Brucella conteniendo 15% de glicerol o sustituto. Dispensar en pociones de 0.5 ml en pequeños tubos con rosca y coloque en lo profundo del congelador a -45°C..
También se puede utilizar la modificación de Ultracongelamiento en Nitrógeno líquido, que consiste en colocar en una ampolla especial dentro de un aparato específicamente designado para el mantenimiento de cepas en nitrógeno líquido.
Ambos sistemas preservan las bacterias por largos periodos de tiempo.
b) Cultivos Semistock:
Este término se refiere al mantenimiento de cultivos por un periodo intermedio entre el relativamente permanente cultivo en Stock y el cultivo de cepas control para el trabajo diario. De las 5 técnicas listadas a continuación, solo la de congelamiento es utilizable para el mantenimiento de cepas de anaerobios.
b1) Congelamiento en congelador convencional :
Los congeladores convencionales pueden mantener una temperatura entre
-10 a –25°C. Los cultivos se preparan de la misma manera como en el caso de la ultracongelación y son colocados en el congelador. El método permite la sobrevivencia de bacterias y levaduras en algunos casos por años y en la mayoría de las veces por al menos de 6 a 12 meses.
b2) Cultivo en CTA:
Se preparan tubos con rosca conteniendo Cisteína- Tripticasa y Soya agar.
Inocular el cultivo puro y joven e incube por 18 a 24 horas para obtener un crecimiento moderado, afloje la tapa y mantenga a temperatura ambiente o preferiblemente en refrigeración, si es posible en la oscuridad. Microorganismos menos delicados sobreviven bien por un año y los fastidiosos por 6 meses.
b3) Secado en discos con gelatina:
Este método es conocido también como método Stamp en honor de su creador. Corte pequeños círculos de papel encerado y colóquelo en un plato Petri de vidrio. Esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presión.
Prepare una suspensión de caldo nutriente con 10% de gelatina en polvo ( Peso por Volumen ) y 0.25% de ácido ascórbico ( P x V ) y dispense en
tubos con rosca y esterilice en autoclave.
Haga una suspensión fuerte de un cultivo puro y joven y coloque una gota del mismo con una pipeta estéril sobre uno de los discos de papel acerado
estéril en un plato Petri. Con una pinza estéril, transfiera el disco a un desecador de vacío conteniendo Pentaóxido de fósforo. Evacue el desecador con la bomba de vacío. Cuando el disco está seco, asépticamente introducir en un tubo estéril con tapa de rosca y colocar en el refrigerador.
Para hacer un subcultivo del disco, asépticamente retire un círculo de papel con las colonias y colocarlo en un tubo conteniendo un caldo de cultivo e incubar por 24 horas a 35C y luego hacer transplante a agar sangre e incubar nuevamente.
b4) Conservación en medio de cultivo inclinado con aceite mineral:
Es un método especialmente utilizado para hongos, pero es útil también para algunas bacterias.
En el caso de los hongos, se utiliza un cultivo joven y bien esporulado en un medio de cultivo inclinado, tal como agar de Sabouraud-dextrosa. Cubrir completamente con aceite mineral estéril. El aceite debe ser esterilizado a 15 libras de presión por 45 minutos, para asegurar su esterilidad absoluta.
Para reactivar la cepa, colocar la boca del tubo cerca de la llama de un mechero o incinerador y remueva una porción visible de crecimiento con una asa estéril larga o una aguja.
Este método permite la sobrevivencia por muchos años.
Si el método se va a utilizar para conservar bacterias, se utiliza Agar de Cerebro–Corazón o agar Mueller-Hinton suplementados con hemoglobina al 2% e Isovitalex al 1%. Los medios se sirven en tubos con rosca. Se esterilizan y luego se les hace coagular en forma inclinada.
Las bacterias son inoculadas en el medio e incubadas a 35°C por 24 horas, tomando en cuenta sus requerimientos de oxígeno. Luego las cepas son cubiertas con aceite mineral estéril, hasta 1 cm por encima del final del inclinado. Los cultivos son viables por 2 años a temperatura ambiente.
b5) Mantenimiento en tierra estéril:
Es utilizado primeramente para hongos y bacterias esporuladas.
Esterilice en autoclave tierra suelta en tubos con rosca a 15 libras de presión por 1 hora. Haga una suspensión fuerte del microorganismo joven y esporulado y colóquelo en el tubo con tierra estéril. Deje secar y colocarlo en un refrigerador.
b6) Cultivos de trabajo diario:
Los cultivos control para el trabajo diario, son una forma conveniente para realizar el control de calidad de pruebas de uso frecuente y que requieren una lectura comparativa al momento de su lectura. Tal es el caso de las pruebas de coagulasa y oxidasa, entre otras. Para éste propósito se utilizan cultivos de 24 horas y son transplantados diariamente.
Bacterias resistentes:
Tal es el caso de Estafilococos y Enterobacteriaceas. Se transfiere una colonia joven de un cultivo en Stock o semistock y se transfiere a un tubo con agar nutritivo inclinado e incubar por un mínimo de tiempo tal que haya crecimiento. Guardar en refrigerador. Los cultivos para trabajo diario, son transferidos a otros tubos de agar inclinado cada mes por un intervalo de 6 meses. Después de éste tiempo, se debe volver a hacer otro pase del cultivo stock.
Bacterias delicadas :
Los cultivos de trabajo diario de organismos delicados como
N. meningitidis, N. gonorrhoeae, S. pneumoniae y algunos menos delicados como el S. pyogenes, son preparados a partir del stock e incubados por 24 horas en medios apropiados como agar chocolate en ambiente de CO2 , para luego ser colocados en refrigeración. Después de una serie de 6 transplantes consecutivos, se debe preparar otro cultivo para uso diario a partir de la cepa en stock.
Bacterias anaeróbicas:
Los cultivos para trabajo diario de la mayoría de las bacterias anaeróbicas, pueden ser mantenidos en medio de carne cocida o en Tioglicolato con 0.5% de carbonato de sodio adicionado después de esterilizar por autoclave.
Los cultivos se incuban por 24 a 48 horas y guardados a temperatura ambiente.
Hongos:
Los cultivos de uso diario de hongos, son mantenidos en tubos con agar Sabouraud o sustituto.. Los cultivos se incuban a temperatura ambiente hasta que haya crecimiento, y ocurra la esporulación, para luego ser colocados en refrigeración. Los cultivos de trabajo deben ser transferidos cada 2 meses . Pasado éste tiempo se debe preparar otro cultivo de trabajo a partir de la cepa en stock.
Cultivos de trabajo comerciales:
Son preparados por casa comerciales utilizando cepas conocidas como la ATCC.. Estas son estables en refrigeración por un año. Tal es el caso de Bact-Chek de Roche Diagnostics, Bactrol Disk de Difco, entre otras.
Para reactivar las cepas se colocan en un caldo nutritivo como el caldo de Tripticasa y Soya e incubados por 24 horas a 35°C. Luego se hace un transplante a un medio de enriquecimiento o a agar sangre.
Almacenamiento de cepas VISA / VRSA :
Si el laboratorio detecta alguna cepa de Estafilococo aureus sospechosa de ser VISA ó VRSA, se recomienda congelar la cepa a -60 °C / -70°C en medio líquido estándar con 15% de glicerol. Si no se cuenta con el congelador, se puede colocar una cepa recién sembrada en un tubo inclinado con tapa de rosca conteniendo medio inclinado de TSA . Incubar a 35°C por 24 horas y luego apretar la tapa de rosca y mantener el tubo a 2 – 8°C. Repetir el subcultivo y todo el proceso, para mantener un mínimo de almacenamiento.
2. Mantenimiento del Cepario:
Se debe tener especial cuidado en el mantenimiento del cepario, ya que el mismo constituye una ayuda importante en la validación de equipos, materiales, reactivos y habilidad del personal. Debe existir un programa metódico de transplantes de cepas , archivo de cada uno de los cultivos con sus características bioquímicas, sensibilidad a los antibióticos, origen de la cepa, método de identificación, fecha de siembra y próximo transplante, etc
3. Cepas ATCC:
En nuestro medio por situaciones muy especiales y altamente beneficiosas, podemos tener acceso a las cepas control del American Type Culture
Collection ( ATCC ) , la colección más grande e importante del mundo. Estas cepas bacterianas pueden ser utilizadas como control en una gran variedad de
utilidades, lo cual nos permite conocer el grado de confiabilidad de los productos comerciales o elaborados en el laboratorio.
A continuación algunas referencias de las cepas ATCC:
Microorganismo ATCC Medio Característica
E. coli 25922 McConkey Colonia rosada
S. typhimurium 14020 McConkey Colonia incolora
P. mirabilis 12453 McConkey Colonia incolora
E. faecalis 29212 McConkey No crece
St. pyogenes 19615 Agar sangre ß-hemólisis
St. pneumoniae 6305 Agar sangre alfa-hemólisis
S. epidermidis 12228 Agar sangre no hemolítico
Candida albicans 60193 Agar sangre no hemolítica
Candida albicans 60193 Tubos germinales Positivo
Candida tropicalis 66029 Tubos germinales Negativo
S. aureus 25922 Manitol sal Colonia amarilla
S. epidermidis 12228 Manitol sal Colonia incolora
P. mirabilis 12453 Manitol sal No crece
M. tuberculosis (TBC) 2577 Low-Jensen Crece. Incoloro
M. kansazsi ( I ) 12478 Low-Jensen Crece. Amarillo + luz
M. scrofulaceum (II ) 19981 Low-Jensen Crece. Amarillo – luz
M. intracellulare ( III ) 13950 Low-Jensen Crece. Incoloro
M. fortuitum ( IV ) 6841 Low- Jensen Crece. < 7 días.
E. coli 25922 Low-Jensen No crece
LISTADO DE CEPAS ATCC SUGERIDAS PARA CONTROL DE CALIDAD
MICROORGANISMO ATCC
Campylobacter jejuni ………………………………………. 33290
Enterococcus faecalis ……………………………………….. 29212
Escherichia coli………………………………………………… 25922
Escherichia coli ……………………………………………….. 35218
Proteus vulgaris ………………………………………………. 8482
Pseudomona aeruginosa …………………………………… 27853
Salmonella typhimurium …………………………………. 14028
MICROORGANISMO ATCC
Shigella sonnei ……………………………………………….. 9290
Shigella sonnei ……………………………………………….. 25911
Shigella flexnerii …………………………………………….. 12022
Enterobacter aerogenes ……………………………………. 13048
Staphylococcus aureus …………………………………….. 25923
Staphylococcus aureus …………………………………….. 29213
Staphylococcus epidermidis ……………………………… 12228
Steptococcus pyogenes …………………………………….. 19615
Streptococcus pneumoniae ………………………………… 6305
Streptococcus pneumoniae ………………………………… 49619
Streptococcus faecalis ……………………………………….. 19433
Haemophilus influenzae …………………………………….. 49247
Haemophilus influenzae …………………………………….. 49766
Neisseria gonorrhoeae ……………………………………….. 49226
Escherichia coli 0157:H7 …………………………………… 43894
Bacteroides fragilis ……………………………………………. 23745
Clostridium perfringes ……………………………………….. 3624
Clostridium sporogenes ……………………………………. 19404
Clostridium tertium …………………………………………… 19405
Clostridium novyi A ………………………………………….19402
Fusobacterium necrophorum ………………………………..25286
Fusobacterium nucleatum ……………………………………25586
4. Transporte de cepas bacterianas:
La mayoría de las naciones han implementado regulaciones internacionales para el empaque y transporte de materiales biológicos potencialmente nocivos para el hombre o los animales. Estas reglas intentan proteger al público de accidentes al tener contacto directo o indirecto con dichos productos. El personal que prepara éste envío debe ser apropiadamente entrenado en las formas de empaque y en las regulaciones internacionales que lo rigen.
Solo como una guía enumeraremos algunas regulaciones foráneas:
U.S Public Health Service, 42 CFR part 72,
Interstate shipments of Etiologic Agents.
International Air Transport Association.
Dangerous Goods Regulations.
Unites Nations
Recommendations of the Committee of Experts on the Transportation of Dangerous
Goods.
U.S Department of Labor, Occupational Safety and Health Administration, 29 CFR
Part 1910.1030, Bloodborne Pathogens.
Generalmente el transporte de agentes etiológicos requiere un doble o triple empaque, dependiendo de las regulaciones del país de destino. Si la cepa está contenida en un tubo de vidrio, se recomienda que sea pequeño y de vidrio grueso. Este a su vez debe estar inmerso en un envase de metal con material aislante como el aserrín o foam desmenuzado. A éste envase se le puede adicionar otro que contenga igualmente aserrín o foam , dependiendo de las regulaciones y por último la caja externa no porosa, con recubrimiento de cera en su interior y a prueba de derrame. En ésta caja irán las etiquetas , guía aérea, etiquetas de advertencia, números telefónicos para contactar en caso de emergencia, tanto en el país de origen como en el de destino. Igualmente se etiquetará con un símbolo de material peligroso de color rojo.
Supervisión del personal
El personal es el factor más importante en la calidad del trabajo en el laboratorio de microbiología. Este personal debe tener una dedicación y actitud positiva hacia el trabajo, capacidad académica, actualización constante y contar con los elementos indispensables para su labor.
1. Evaluación del personal:
La competencia del personal de microbiología, debe ser certificada por la revisión de su hoja de trabajo, la interpretación de muestras desconocidas , su habilidad técnica y exámenes escritos anuales. Se debe llevar un registro profesional acerca de su evaluación académica, reporte sobre su capacidad de trabajo, asistencia a programas de educación continuada, responsabilidad, asistencia, trabajos de investigación, charlas, conferencias y su evaluación profesional anual.
Todo nuevo empleado que se adicione a la plantilla de la sección, debe ser documentado, evaluado y certificado, incluyendo las fases pre-analíticas, analíticas y post-analíticas de funcionamiento del laboratorio.
2. Programa de docencia:
Un elemento fundamental en el mantenimiento apropiado de la competencia del personal es el programa de educación continuada. Este programa mantiene al personal informado en los avances en la detección e identificación de agentes etiológicos, nuevos test, equipos, cambios en la taxonomía bacteriana y la evaluación correcta de las pruebas de sensibilidad a los antibióticos.
Este programa puede incluir charlas, mesas redondas, lecturas de artículos de interés, discusión de casos clínicos, evaluación de nuevos test o equipos, revisión de la literatura sobre temas específicos, trabajos de investigación, etc. Se debe llevar un control sobre la participación individual del personal en el programa, su asistencia y actividad, lo cual formará parte de su evaluación anual.
3. Evaluación del informe final:
El resultado final de la evaluación de un espécimen clínico luego de cumplir con todas las etapas de investigación, es el informe final que implica una identificación etiológica, si la hubiera, y su correspondiente sensibilidad a los antibióticos. Para llegar a éste resultado, el laboratorio de microbiología debe haber agotado todos los elementos diagnósticos de que dispone y hacer un juicio respecto a la posibilidad de que dicho informe represente el potencial agente infeccioso, tomando en cuenta los factores que están involucrados tales como el tipo de muestra, microorganismo aislado, edad del paciente, procedencia, informes previos, frotis directo y el patrón de comportamiento frente a los antibióticos, entre otros.
En todo informe final debe prevalecer el concepto de rapidez y seguridad diagnóstica. Es recomendable y así está establecido en manuales foráneos, que los resultados sean evaluados antes de su envío por un el jefe del laboratorio de microbiología o en su defecto por un Supervisor con experiencia y capacidad demostrada, con el fin de minimizar potenciales errores, omisiones o interpretaciones del informe final, tomando en cuenta el valor que éste reporte tendrá en la evaluación, tratamiento y la salud del paciente.
Es importante en ésta etapa establecer los " Valores de Alerta " en microbiología, los cuales son aquellos resultados de mayor preponderancia, ya sea por el tipo de microorganismo involucrado o por su significado en el control de enfermedades de notificación obligatoria.
i) VALORES DE " ALERTA " EN MICROBIOLOGIA
* Detección de microorganismos en LCR
* Detección de antígenos de Cryptococcus
* Frotis BAAR positivos
* Cultivo de LCR positivo
* Aislamiento de Shigella dysenteriae
* Aislamiento de E. coli 0157:H7
* Aislamiento de Estafilococos con sensibilidad reducida a la Vancomicina.
* Aislamiento de agentes etiológicos de notificación obligatoria.
* Aislamiento de cepas productoras de betalactamasa de espectro extendido (ESBL).
* Tinta china positiva
* Detección de antígenos en LCR
* Hemocultivos positivos
* Aislamiento de M. tuberculosis multirresistente
* Aislamiento de typhi
* Aislamiento de Neisserias patógenas
* Aislamiento de microorganismos relacionados al bioterrorismo.
Cuando se observen " Valores de Alerta " , se debe notificar al jefe de la sección.
4. Control de calidad externo:
Es recomendable que los laboratorios de microbiología puedan participar en programas de evaluación externa. Estos programas miden la capacidad del laboratorio para evaluar un desconocido y llegar a un resultado seguro. Los mismos consisten en la identificación de muestras o microorganismos desconocidos en los cuales se debe informar del resultado de la identificación, pruebas utilizadas para el diagnóstico etiológico y sensibilidad a los antibióticos.
El Director del laboratorio debe escoger el programa que sea consistente con el nivel de calidad de su laboratorio. Generalmente estos desconocidos vienen con un abstracto clínico y son recibidos al menos 2 veces al año. Los laboratorios que ofrecen éstos programas invalidan aquellos laboratorios que fallan en responder el cuestionario, por lo que es necesario mantener un contacto muy especial para no perder éste beneficio. Los resultados de la evaluación de los desconocidos deben ser discutidos por todo el personal antes de su informe al laboratorio generador del programa.
Algunos laboratorios que ofrecen programas externos de evaluación de la calidad son :
Accutest:
POBox 999
Westford, MA 01886-0031
American Association of Bioanalysts Proficiency Testing Service
205 West Levee Street
Brownsville, TX 78520-5596
American Proficiency Institute
1159 Business Park Drive
Traverse City, MI 49686
The College of America Pathologists- Survey
College of American Pathologists
325 Waukegan Road
Northfield, Il 60093-2750
Idaho Bureau of Laboratories Proficiency Testing Program
2220 Old Penitenciary Rd.
Boise, ID 83712
Medical Laboratory Evaluation (MLE ).
2011 Pensnsylvania Av, NW, Suite 800
Washington, DC 20008-1808
New Jersey Department of Health Proficiency Testing Program, CN 360
Trenton, NJ 08625-0360
USA
Pacific Biometrics
110 Eastlake Avenue East
Seatle, WA 98109
Puerto Rico Department of Health
Laboratory Service Program
Department of Health of Puerto Rico, Bulding A
Call Box 70184
San Juan, Puerto Rico 00936
( Tel. (800)-769-7774 )
Universitair Ziekenhuis St. Rafael B-300
Bacteriologie
Leuven – Belgium
Att: Prof. Dr. J. Vandepitte
Prof. J. Verhaegen
Tel. 0032-16-332150
Fax. 0032-16-336321
5. Certificación del laboratorio de microbiología:
Un nuevo concepto en la organización de los laboratorios es la acreditación a Asociaciones especializadas que promueven la excelencia en la calidad de los servicios de sus miembros. Esta calidad está enfocada no solo en los aspectos técnicos, sino también en los administrativos, racionalización de recursos, planificación gerencial, costos de operaciones, calidad de servicio al cliente, es decir, un enfoque de Calidad Total. En los Estados Unidos éstas acreditaciones están validadas por asociaciones como la American Society for Microbiology, College of American Pathologists, American Association of Bioanalysts, etc. En Latinoamérica algunas asociaciones de laboratorios han creado comités de acreditación para laboratorios públicos y privados.
El enfoque moderno en un mundo en que las distancias se han acortado y los conceptos de globalización son una realidad, la acreditación proporciona a los miembros la posibilidad de comunicarse mejor con otros laboratorios del mundo, lo cual permite un intercambio de experiencias en metodologías, compra de equipos, entrenamiento de personal, etc
Los problemas legales y altos costos de operaciones, han obligado a los grandes laboratorios a encontrar un modelo aún más complejo de aseguramiento de la calidad, con el fin entre otros, de bajar costos. La Organización Internacional de Estándares ha desarrollado una guía llamada ISO 9000 que establece un flujograma de trabajo en los programas de aseguramiento de la calidad y unifica los diferentes actividades del control de calidad. La categoría apropiada para los laboratorios clínicos en general es el ISO 9002 el cual comprende 18 elementos de control. Para que un laboratorio pueda ser certificado bajo la norma ISO, debe cumplir con todos los elementos del estándar.
En éstos casos un equipo de Aseguramiento de la Calidad implementa las medidas en cada una de las área con el fin de que cuando se esté listo, pueda pasar las pruebas a que es sometido todo el sistema por parte de auditores certificados. La obtención de ésta certificación ISO 9002 , y especialmente la nueva Norma 15189 , es el máximo galardón a la excelencia en control de calidad en los laboratorios clínicos.
Proformas de reporte del control de calidad
Se adjuntan a continuación las hojas proformas utilizadas para llevar el registro del control de calidad en microbiología:
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| LABORATORIO CLINICO |
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| CHMDrAAM,CSS |
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| CONTROL DE TEMPERATURA |
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| CONGELADORES |
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