OBSERVACIONES.
Dibuja todos los pasos empleados en el sembrado de las placas de petri y los resultados de las colonias bacterianas que crecieron.
CONCLUSIONES:
_______________________________________________________________________________________
Práctica Nº 05
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio_______________________________ Calif:_______
PRÁCTICA Nº 06
Estudio de hongos
OBJETIVO:
Aislar hongos ambientales de un establecimiento de salud mediante el método de exposición en placa
Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva de distintas especies de mohos.
Observar la morfología de los hongos y distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre distintos tipos de esporas y las estructuras que las originan
MATERIAL
Ambientes de un establecimiento de salud
4 placas con medio de cultivo estéril de Agar Sabouraud
Lupas
1 varilla de vidrio doblada
Asa bacteriológica
Alcohol al 70%
Microscopio
Porta y cubreobjetos (22×22 mm) limpios y desengrasados con alcohol
Solución de lactofenol al azul algodón
Cinta adhesiva transparente
INTRODUCCION
Los hongos no son plantas ni animales, aunque se parezcan en algunas de sus características tanto a las unas como a los otros. A las plantas, por ser organismos sedentarios que se encuentran fijos a un sustrato y, mientras están vivos, no cesan de crecer. A los animales, pues, aunque las células de los hongos poseen pared como las de las plantas, las paredes celulares fúngicas son ricas en quitina, la misma sustancia que hace duro el esqueleto externo de los insectos.
En realidad, los organismos que conocemos como hongos tienen diferentes orígenes en el árbol de la vida, razón por la cual conforman el reino de los hongos (Fungi o Eumycota).
Se estima que existe más de un millón de especies de hongos en el planeta, pero tan sólo unas 70,000 de ellas han sido descritas por los especialistas, lo cual hace evidente la necesidad de contar con más científicos (micólogos) que estudien estos organismos. Mientras tanto, muchas especies de hongos se han extinguido y otras se encuentran amenazadas en todo el mundo.
Los hongos tienen distintos hábitos de vida. Los hongos saprófitos, es decir descomponedores de materia orgánica, cumplen una función ecológica de la mayor relevancia pues garantizan el reciclaje de la materia muerta y, por lo tanto, la recirculación de sustancias nutritivas en los ecosistemas. Los hongos parásitos, que viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento de éstos y llegan a producir enfermedad en su hospedero. Los hongos simbiontes que se asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen alianzas vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los líquenes (asociación de hongo y alga) y las micorrizas (asociación de hongo y raíz de una planta), simbiosis estas de gran importancia en la naturaleza en procesos de colonización de hábitats y de circulación de nutrientes.
Desde la perspectiva económica, los hongos ofrecen múltiples servicios, pues se utilizan como alimentos, levaduras de la masa de pan, fermentadores en la producción de vino y cerveza, en la maduración de quesos y en el control biológico de plagas agrícolas. Además, como fuentes de sustancias que por su actividad biológica pueden ser de enorme utilidad en medicina y en la bioindustria (ej. antibióticos) y como agentes para estimular el desarrollo de las plantas (hongos formadores de micorriza). Sin embargo, también son dañinos cuando actúan como parásitos de plantas y animales o cuando estropean estructuras de madera, alimentos almacenados, libros y hasta obras de arte, amén de ser peligrosos si, por desconocimiento, se consumen aquellos que tienen principios tóxicos o alucinógenos.
PROCEDIMIENTO
AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES
Debes tener tus placas de petri con Agar Sabouraud a la que se añadió antibiótico para evitar el crecimiento de microorganismos diferentes a los hongos
Con la compañía de tu profesor supervisor, acude a un ambiente asistencial del establecimiento de salud.
Cuando te encuentres en dicho ambiente, saca tu placa petri y colócala sobre la superficie de una mesa
Luego, abre la tapa de placa y déjala en exposición por espacio de 2 minutos
Transcurrido el tiempo, tápala nuevamente y rotula las placas de petri el nombre del servicio asistencial
Haz el mismo procedimiento con otras placas y en diferentes servicios del establecimiento de salud, anotando siempre el nombre del ambiente
Luego, traslada tus placas al laboratorio y déjalas incubando a temperatura de 30°C por 3 o más días
Observa el crecimiento de colonias de hongos
ESTUDIO MICROSCÓPICO
Preparación en cinta adhesiva
Técnica
Coloca sobre un portaobjetos una gota de solución de lactofenol no demasiado grande.
Corta un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.
Toca con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecido o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas.
Pega la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.
Elimina el colorante sobrante con un papel de filtro.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué es un hongo?
_________________________________________________________
2. ¿Por qué los hongos que causan micosis cutánea se llaman queratinofílicos?
_____________________________________________________________________________________
3. Menciona 4 hongos causantes de micosis subcutánea en los humanos
______________________________________________________________________________________
4. ¿Debido a qué Candida albican es conocido como un hongo causante de micosis oportunista?
_______________________________________________________________________________
5. Menciona la forma de prevención de las micosis cutáneas
___________________________________________________________________________________
6. ¿Por qué se añade antibiótico al medio de cultivo para aislar hongos?
____________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Dibuja todo el proceso llevado a cabo para el aislamiento de hongos, así como los resultados obtenidos.
CONCLUSIONES
_____________________________________________________
Práctica Nº 06
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio______________________________ Calif: _______
PRÁCTICA Nº 07
Aislamiento de bacterias patógenas de heridas y secreciones
OBJETIVO:
Demostración de la presencia de bacterias patógenas en la piel y garganta, mediante el método de siembra en placa.
MATERIAL
Placas de petri con Agar- Sangre (GS)
Placas de petri con Manitol sal Agar (MSA)
Placas de petri con Agar vogel y Jonson (AVJ)
Solución salina estéril
Exudado faríngeo
Raspado de piel
Mechero
Asa de platino
Hisopos estériles
INTRODUCCIÓN
La piel (en condiciones normales) es una barrera que impide la penetración de los gérmenes, por ello actúa como mecanismo de defensa. Los mamíferos son frecuentemente infectados por algunas de las bacterias preexistentes en su medio ambiente, aunque en general viven en equilibrio con estos microorganismos, manteniéndoles limitados a zonas relativamente superficiales de su organismo. Sin embargo las bacterias infecciosas producen enfermedades al invadir tejidos más profundos. Por lo tanto para mantener la salud, el huésped debe defenderse constantemente frente a la invasión por parte de las bacterias.
Los factores mecánicos, químicos y microbianos desempeñan un papel importante al restringir la colonización de las bacterias a las superficies corporales.
Factores mecánicos: Las superficies epiteliales de la piel y de las mucosas constituyen barreras que resultan más o menos impermeables a las bacterias. La impermeabilidad de la piel es mayor que en la mayoría de las mucosas. Cuando se altera la integridad de la superficie epitelial, pueden desarrollarse infecciones subcutáneas. Las bacterias que causan más frecuentemente estas infecciones son las que existen habitualmente en la superficie cutánea, folículos pilosos y glándulas sudoríparas en la piel, es decir los estafilococos.
Factores químicos: La acidez de las secreciones gástricas mantienen sin duda la esterilidad habitual del estómago. El pH bajo de la piel (3-5), debido en gran parte a los productos ácidos del metabolismo bacteriano, frena sin duda el crecimiento de muchos microorganismos que toman contacto con sus superficie
Factores microbianos: El antagonismo microbiano inhibe el crecimiento de muchas bacterias y hongos potencial mente patógenos en lugares superficiales donde de no ser así, podrían producirse enfermedades.
La flora de la región faríngea presenta problemas peculiares para el aislamiento e identificación de microorganismos, por lo tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos con acción patógena. Es importante recordar que algunos microorganismos tienen capacidad patógena definida y su presencia es un indicio claro de enfermedades, en tanto que otros, llamados oportunistas, guardan una posición ambigua y pueden encontrarse tanto como componentes de la flora normal, como asociados a procesos patológicos, causados por otros microorganismos que son verdaderos responsables (por ejemplo los virus) Los estafilococos están entre las primeras bacterias que se reconocieron como patógenas, y se descubrieron por primera vez a principios de la década de1880.
Se encuentran ampliamente distribuidos por la naturaleza, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto respiratorio superior; muchas de las especies que se encuentran en el hombre son comensales. La especie predominante patógena para el hombre es el Staphylococcus aureus, constituye la causa más común de las infecciones supurativas para el hombre. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado faríngeo y exudado de piel, no tiene importancia diagnóstica, ya que se considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado clínico.
PROCEDIMIENTO:
Limpia y esteriliza el área a trabajar con fenol al 5%
Prende el mechero cerca de donde se va a trabajar, si es posible coloca otro
Humedece el hisopo en solución salina estéril, pásalo sobre la superficie de la piel (con o sin pelo)
Descarga el hisopo en tres placas de petri con el medio ya preparado. (Es recomendable que para cada dos placas se utilice un solo hisopo con muestra). No retires completamente las tapas de los medios de cultivo para evitar que se contaminen
Quema el hisopo y deséchalo.
Esteriliza el asa de platino hasta el rojo vivo, enfríalo introduciéndolo en un extremo del Agar
Realiza el sembrado de los microorganismos por el método de estría utilizando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de los medios de cultivo.
Incuba a 37ºC por 24-48 horas y observa los resultados.
Repite el mismo procedimiento pero ahora toma muestra de la faringe con hisopos estériles en las zonas afectadas como: amígdalas, pared posterior de la faringe, en general cualquier área que manifiesta signos de inflamación, exudados y úlceras, procurando no tocar con el hisopo la lengua.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS
AGAR SANGRE
Para el aislamiento, cultivo y detección de actividad hemolítica de Staphylococcus, Streptococcus y otros microorganismos exigentes. Se observan colonias blancas casi grises, grandes, convexas de consistencia butirácea, Presentan bordes regulares. Se observa que presenta hemólisis. Las colonias en medio sólido son redondeadas, uniformes, estos crecen rápidamente a 37ºC pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura ambiente (20ºC).
MANITOL SAL AGAR (MSA)
Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clínicas de estafilococos El manitol cuando es utilizado por los microorganismos, vira de su color original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas, convexas, de consistencia butirácea, presentan bordes irregulares. S. aureus forma colonia amarilla, S. Epidermidis, colonia incolora
AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ)
Para la detección de Staphylococcus aureus coagulasa-positivo, se observan colonias negras pequeñas, bordes irregulares con halo amarillo. Para S. epidermidis y otros pequeñas, negro-grisáceos, sin halo, el medio presenta un vire de rojo pálido a amarillo.
B) DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS
Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las siguientes características:
FORMA: Puntiforme, circular, rizoide, irregular, filamentosa.
TAMAÑO: Grande (más de 3 mm.), mediana (2-3 mm.), pequeña (1-2 mm.)
COLOR. Reportar el color final después de la incubación
BORDE: Entero, ondulado, lobulado, filamentoso, ondeado
ELEVACIÓN: Plano, elevado, convexo, pulvinado, umbonado
SUPERFICIE: Suave, brillante, rugosa, plegada, seca, polvorienta
CUESTIONARIO:
1. Explica a qué se debe que las bacterias son conocidas como piógenas
__________________________________________________________________________________
2. ¿Qué tipo de bacterias son encontradas con mayor frecuencia en quemaduras?
______________________________________________________________________________________
3. ¿Qué finalidad tiene humedecer el hisopo con solución salina estéril?
________________________________________________________________________________________
4. ¿Qué son hemolisinas y cuantos tipos hay?
__________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué es la infección intrahospitalaria?
_______________________________________________________________________________________
6. ¿Qué otros patógenos pueden encontrarse en heridas?
________________________________________________________________________________________
7. Después de haber incubado a 37ºC por 48 horas describe las colonias obtenidas en cada medio de cultivo utilizado
GELOSA SANGRE MANITOL SAL AGAR (MSA)
.FORMA: FORMA:
.TAMAÑO: TAMAÑO:
.COLOR. COLOR:
.BORDE: BORDE:
.ELEVACIÓN: ELEVACIÓN:
AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ) ESTAFILOCOCO S110
.FORMA: FORMA:
.TAMAÑO: TAMAÑO:
.COLOR. COLOR:
.BORDE: BORDE:
.ELEVACIÓN: ELEVACIÓN:
OBSERVACIONES
Dibuja y colorea todos los resultados obtenidos después de las 48 horas de haber sido incubados.
CONCLUSIONES:
__________________________________________________________________________________________
Práctica Nº 07
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 8
Aislamiento de patógenos en infección urinaria
OBJETIVOS
Que los alumnos conozcan los patógenos causantes de infección urinaria.
Presenciar la técnica que se utiliza para el urocultivo.
Interpretar dicha técnica
MATERIAL
Muestra de orina
Tubos con solución salina fisiológica estéril (9 ml)
Agar Tripticase Soya
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)
Agar Mac Conkey
Pipetas de 1 ml estériles
Placas Petri estériles
Asa de Kolle
Mechero
INTRODUCCIÓN
La ITU es una de las enfermedades más frecuentes, que consiste en la infección por algún agente patógeno (bacterias con mayor frecuencia), de cualquiera de los segmentos del aparato urinario: riñones, uréteres, vejiga o uretra.
PIELONEFRITIS: es la infección del riñón.
URETERITIS: es la infección de uno o de los dos uréteres.
CISTITIS: es la infección de la vejiga.
URETRITIS: es la infección de la uretra.
A las Pielonefritis se les conoce también como Infecciones del Tracto Urinario Alto. A las Cistitis y Uretritis también se les conoce como infecciones del Tracto Urinario Bajo
Las Ureteritis son generalmente una extensión de la infección en el riñón o en vejiga (Cistitis).
FACTORES PREDISPONENTES A UNA ITU
El sexo femenino, porque la longitud de la uretra femenina es pequeña, y se favorece que las infecciones asciendan desde la región perineal.
Los varones que tienen la próstata aumentada de tamaño, porque se tiende a retener la orina debido a que la próstata aumentada de tamaño genera obstrucción parcial o total en el segmento que corresponde a la uretra.
Uso de ropas ajustadas, predispone a desarrollar infecciones urinarias por la presión que ejercen estos que hacen que la orina refluya hacia el interior de las vías urinarias favoreciendo la contaminación de estas.
La retención voluntaria de la orina, es importante que una persona use el uirinario, tan pronto siente ganas de hacerlo
Las personas que ingieren poca ingesta de líquidos.
Las personas diabéticas, por la facilidad que tienen para todo tipo de infección.
Aquellos que tienen alguna malformación congénita de las vías urinarias.
SÍNTOMAS DE LAS ITU
Lo fundamental es el ardor al orinar conocido como disuria, otros síntomas agregados pueden polaquiuria (orinar varias veces en cantidad menor a lo habitual), dolor al final de la emisión, fiebre, náuseas, vómitos, malestar general, dolor lumbar dependiendo de la localización de la infección. Cuando es una infección urinaria alta se suele acompañar de fiebre, malestar general, dolor lumbar, náuseas o vómitos; mientras que cuando es baja no.
Si se trata de una uretritis gonocócica (se hace únicamente evidente en el varón), que es una enfermedad de transmisión sexual, se presenta ardor al orinar y al inicio de la micción se evidencia una secreción blanquecina maloliente con el color parecido al de la "leche condensada".
UROCULTIVO
EL urocultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina constituye un método excelente para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan el aparato urinario.
La combinación de piuria con bacteriuria considerable sugiere la presencia de una infección urinaria.
Utilidad Clínica
Cuando los síntomas indican una posible infección urinaria como: dolor y sensación de calor al orinar, así como urgencia frecuente de orinar.
Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque no muestre síntomas de infección.
En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en la orina que pueda causar algún problema al bebé.
PROCEDIMIENTO
Toma de muestra en mujeres
La muestra debe ser tomada preferentemente en el Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas instrucciones en su casa.
Debe hacerse una antisepsia previa de la zona genital, por lo tanto debe tener a la mano lo siguiente:
jabón desinfectante
agua hervida o agua estéril
gasa estéril o un paño acabado de lavar
el recipiente para tomar la muestra.
Proceda primero a lavarse las manos y luego siéntese en el inodoro, lo más hacia atrás que pueda. Separe los labios genitales con una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a asearse toda la zona genital con el jabón desinfectante. Enjuague con abundante agua estéril y luego seque bien con gasa estéril o con un paño limpio.
Proceda a recoger la orina, destapando previamente el frasco SÓLO EN EL MOMENTO DE LA MICCIÓN y sin tocar con los dedos su interior, coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar y recoja en el frasco, sólo la muestra del chorro del medio es decir, no debe recoger ni la primera, ni la última parte del chorro de orina.
Tape muy bien el frasco y rotúlelo con su nombre.
Tráigalo al Laboratorio lo más pronto posible, en un recipiente con hielo, cuidando de que no se bote el contenido.
Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kass para evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de contaminación, se realiza de la siguiente manera:
Homogeneiza la muestra mediante agitación.
Diluye al 1:10, colocando 1 ml. de orina en 9 ml. de suero fisiológico estéril.
Prepara diluciones al 1:100; 1: 1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:10.
Deposita 1 ml. de cada dilución en placas Petri esterilizadas, sobre las cuales vacía un tubo de agar tripticase soya, fundido y enfriado a 45°. Mediante rotación suave, distribuye homogéneamente la siembra.
Lleva a incubar todas las siembras a 37ºC durante 24 a 48 horas.
Para calcular el número de colonias elige placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas éstas, basta multiplicar su número por la dilución respectiva para obtener la cuenta total.
Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:
No hubo desarrollo microbiano.
Menos de 10 000 colonias por ml.
Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.
Más de 100 000 colonias por ml.
Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias/ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por ml, ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstrucción uretral, infecciones crónicas e infecciones por cocos grampositivos.
Examen cualitativo
El estudio cualitativo, que conduce a la identificación del agente, se realiza mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar eosina azul de metileno (EMB) o MacConkey.
La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus propiedades bioquímicas y características serológicas. Esto permite establecer relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de reinfección. De esto deriva el valor que tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aeruginosa) y del antibiótico. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma cepa.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué tipos de bacterias pueden causar infección urinaria?
___________________________________________________________________________________________________________________________
2. ¿Qué puede suceder cuando una mujer tiene bacteriuria asintomática?
_________________________________________________________________________________________________________________
3. ¿Por qué la mujer es más propensa a la ITU?
_________________________________________________________________________________________________________________________
4. ¿Qué medidas se debe seguir para evitar las ITU?
______________________________________________________________________________________________________
5. Investiga qué grupo de edad tiene mayores casos de ITU en los tres hospitales de Ica
__________________________________________________________
OBSERVACIONES
Dibuja lo que observaste en la práctica
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________
Práctica Nº 08
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 09
Control de los microorganismos: el antibiograma
OBJETIVO:
El alumno manejará algunas técnicas para poner de manifiesto la actividad de los antibióticos sobre el crecimiento microbiano.
MATERIAL:
Placas de petri con medios de cultivo Mueller-Hinton.
Asa bacteriológica
Mechero
Sensidiscos (antibiogramas)
Fenol al 5%
Cultivo de en caldo nutritivo de 18 horas de Pseudomonas aeruginosa
Cultivo de 18 horas Staphylococcus aureus en manitol sal Agar
Cultivo de 18 horas de Salmonella typhi en medio Mac Conkey
INTRODUCCIÓN
ANTIBIÓTICOS
Son sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos causantes de una infección producida por bacterias (faringitis, bronquitis, otitis, neumonía, amigdalitis, etc). No son eficaces cuando la infección es producida por virus (gripe).
Cada tipo de antibiótico será efectivo para destruir una clase de microorganismos en función de su modo de actuación. Se les llama antibióticos de amplio espectro a los que son efectivos frente a un gran número de agentes microbianos, los microorganismos causantes de la infección son capaces de desarrollar resistencias al antibiótico de manera que este no será eficaz para eliminarlos. Cada año se investiga creando nuevos antibióticos eficaces para las formas microbianas resistentes a sus anteriores tratamientos. Se deben usar siempre bajo prescripción médica.
Existen pruebas (antibiogramas) que determinan el antibiótico más eficaz para cada infección, pero normalmente se sigue un protocolo de actuación de los antibióticos de elección para cada tipo de infección. Es el médico el profesional que juzga la infección existente y el antibiótico eficaz para su tratamiento.
Los antibióticos siempre se deben tomar bajo prescripción médica y cumplir el tratamiento completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar a recaídas que precisarán el tratamiento con otro tipo de antibiótico por haber desarrollado resistencia al primero
MODO DE ACCION DE LOS ANTIBIÓTICOS
Inhibición de la síntesis de la pared celular.
Alteración sobre la membrana citoplásmica.
Inhibición de la síntesis proteica.
Bloqueo de la síntesis de los ácidos nucleicos.
ANTIBIOGRAMAS
Para estudiar la sensibilidad de un microorganismo por técnicas de difusión se dispone de dos sistemas, el de discos de papel impregnados con el antibiótico y las tabletas, consistentes en una suspensión del antibiótico liofilizada y comprimida en material inerte. Los fabricantes recomiendan conservar los discos a –20 °C para largos periodos o entre 2 y 8 °C si se utilizan en el plazo de una semana. Por el contrario, las tabletas se han considerado más estables, pudiéndose almacenar a temperatura ambiente y manteniendo su actividad más tiempo que los discos .Por lo que respecta a la temperatura de conservación, al comparar para cada antibiótico los diámetros de los halos de inhibición de los discos conservados entre 4 y 6 °C con los conservados a temperatura ambiente no se encontraron diferencias significativas a lo largo de todo el estudio; tampoco se encontraron diferencias al comparar los halos de las pastillas conservadas entre 4 y 6 °C con las conservadas a temperatura ambiente, de modo que tanto los antibióticos que permanecieron estables durante el tiempo del estudio como los que disminuyeron su actividad lo hicieron de modo paralelo a ambas temperaturas
PROCEDIMIENTO:
A) PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES MICROBIANAS
Suspende la cepa bacteriana en agua destilada logrado obtener una turbiedad del N° 10 del nefelómetro de Mac- Farland. En caso de no tener el nefelómetro solo ve la turbiedad a manera de suspensión.
B) ACTIVIDAD DE LOS ANTIBIÓTICOS EN DISCO
Marca 3 placas Muller-Hinton, o Agar nutritivo con el nombre de la cepa S. aureus, Salmonella typhi y otra con Ps. aeruginosa.
Toma con un hisopo diferente las muestras que fueron preparadas en el inciso A de este procedimiento y siembra las placas rotuladas
Quema el hisopo y deséchalo.
Coloca los discos individuales sobre las placas y presiona ligeramente los discos contra la gelosa
Incuba las placas a 37ºC durante 24 horas
Mide el diámetro de los halos de inhibición del crecimiento producidos por cada antibiótico y anota los resultados
C) DETERMINACIÓN DE INHIBIDORES EN LA LECHE
Prepara medio de cultivo Muller-Hinton, a 40ºC
Añade 0.5 ml de B. subtilis obtenido de un cultivo de 18 horas en caldo nutritivo.
Echa 15 ml del medio de cultivo ya enfriado a 40ºC y distribuye en forma homogénea
Deja que solidifique.
2. Toma una muestra de leche y calienta en baño María a 80ºC durante 3 minutos exactamente, enfría bruscamente la leche en un baño con hielo
3. Impregna un disco de papel filtro con la leche fría, sécalo ligeramente y con unas pinzas esterilizadas deposita en el centro de la placa de petri preparada anteriormente
4. Incuba la placa de 18 a 20 horas a 37ºC y observa las zonas de inhibición causadas por los antibióticos sobre B. subtilis.
5. Si la muestra de leche contiene antibióticos, alrededor del disco se formará un halo, el cual indica la inhibición de microorganismos y presencia de antibióticos en concentraciones superiores a las permitidas
CUESTIONARIO
1. ¿Qué función tienen los antibióticos?
_____________________________________________________________________________________
2. Explica la acción de los antibióticos en la inhibición de la síntesis de proteínas bacterianas
_____________________________________________________________________________________________
3. Menciona dos causas del porque los microorganismos pueden llegar a hacerse resistentes a los antibióticos
______________________________________________________________________________________
4. Señala 3 antibióticos que actúan sobre la pared celular bacteriana
_____________________________________________________________________________________
5. De qué fuentes se obtienen los siguientes medicamentos: estreptomicina, eritromicina, cefalosporina y cloranfenicol
_______________________________________________________________________________________
6. Según los resultados de tu práctica. ¿Qué medicamentos puedes utilizar para destruir y eliminar a Staphylococcus y Escherichia coli:
__________________________________________________________________________
7. Investiga que tipo de enfermedades pueden ocasionar los microorganismos estudiados en la práctica
________________________________________________________________________________________
8. ¿Cuál es la acción farmacológica de los siguientes medicamentos: cloranfenicol, penicilina, cefalosporinas, gentamicina, ácido nalidíxico? __________________________________________________________________________________________
9. ¿Qué finalidad tiene el lavar el material que se empleará en la realización de prácticas de microbiología?
_______________________________________________________________________________________
10. ¿Por qué se recomienda que la temperatura del lavado del material sea entre 40ºC y 50ºC?
_____________________________________________________________________________________
11. ¿Qué finalidad tiene el empacado antes de la esterilización?
_______________________________________________________________________
12. ¿Qué desventaja tiene el utilizar la esterilización por calor seco?
____________________________________________________________________________________
13. ¿Cómo actúa la radiación ultravioleta en los microorganismos?
___________________________________________________________________
14. ¿Cuál es el proceso de esterilización de los materiales sintéticos que se utilizan en los hospitales?
_______________________________________________________________________________
15. ¿Cómo actúa el proceso de desecación en los microorganismos?
_________________________________________________________________________________________
16. ¿A qué condiciones de temperatura y presión se destruyen todas las formas vegetativas y esporas?
_____________________________________________________________________________________
17. ¿Cómo actúa la esterilización por calor húmedo en los microorganismos?
_______________________________________________________________________________________________
18. ¿Qué es DAN y cuáles son sus ventajas y desventajas?
_________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Realiza dibujos de los resultados obtenidos a las 24 horas de incubación
CONCLUSIONES
____________________________________________________________________________________________________
Práctica Nº 09
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio_______________________________ Calif:______
PRÁCTICA Nº 10
Estudio serológico: antígenos febriles
OBJETIVO:
Describir la acción antígeno – anticuerpo en casos infecciosos
Aplicar la reacción de Widal en la identificación de pacientes con tifoidea.
Interpretar los resultados de la prueba de Widal
MATERIAL
Sangre venosa
Set de antígeno febriles
Micropipetas
Láminas excavadas
INTRODUCCION
Antígenos Febriles es un término referido a un grupo de suspensiones bacterianas, representativo de un número de bacterias patógenas para la especie humana y responsables de la aparición de infecciones (brucelosis, salmonelosis y ciertas rickettsiosis) que cursan con un cuadro febril en el huésped infectado. La mejor forma para establecer la etiología de una enfermedad infecciosa es el aislamiento e identificación del agente causal de la misma. Sin embargo, estos medios de diagnóstico no son siempre de fácil aplicación y es ahí donde radica la importancia del uso de las suspensiones bacterianas en la detección de los anticuerpos presentes en el suero del paciente (método indirecto de diagnóstico).
En el diagnóstico clínico, los resultados obtenidos con el uso de los Antígenos Febriles deben ser considerados siempre en relación a los hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio.
Nuestra sangre consta de un líquido amarillento denominado plasma. Cuando la sangre se coagula se obtiene una porción acuosa a la cual se le denomina suero. En esta porción están suspendidas glucoproteínas, llamadas inmunoglobulinas o "Anticuerpos", que son sintetizados en nuestro organismo. Ante una exposición a una sustancia o microorganismo extraño (Salmonella typhi en este caso), un tipo de células llamadas Linfocitos B (Inmunidad mediada por células) produce estos anticuerpos en su forma unida a la membrana. Este anticuerpo unido a la membrana constituye el receptor de antígenos de la célula B. Los linfocitos B secretan anticuerpos sólo tras su diferenciación, inducida por la interacción del antígeno con el anticuerpo de membrana de este tipo celular. Esta interacción constituye la fase de reconocimiento de la inmunidad. Aquellas partes de la molécula que interactúan y que son reconocidas con más frecuencia por los anticuerpos se denominan "Determinantes antigénicos inmunodominantes" o "epítopes".
Los Linfocitos B se activan ante la presencia del antígeno, se multiplican originando un clon de células iguales y se diferencian en células plasmáticas capaces de elaborar el mismo tipo de Anticuerpo específico contra el antígeno. Los linfocitos B no empiezan su diferenciación y producción de anticuerpos hasta que no reciben la "señal" de los linfocitos TH colaboradores.
Cada molécula de Ig (inmunoglobulina) está formada por 4 cadenas polipeptídicas que en conjunto adoptan la forma de Y. En la molécula se diferencian 3 zonas: la subunidad Fc (pie de la Y) y las dos subunidades Fab (brazos de la Y) que son las que permiten el acoplamiento al antígeno. Existen 5 tipos de inmunoglobulinas humanas:
IgG: Antibacterianas y antivirales. Favorecen la fagocitosis.
Ig A: presentes en las secreciones (mucus, saliva, etc.). Evitan fijación virus.
IgM: Activación del complemento y precipitación de antígenos solubles.
IgE: Intervienen en procesos alérgicos.
IgD: Estimulan la producción de anticuerpos por parte de los linfocitos B
ANTÍGENO (que engendra a su contrario): Moléculas ajenas a un organismo, que son reconocidas como tales y que desencadenan contra el organismo que las presenta, una respuesta inmunitaria.
La unión entre el antígeno y el anticuerpo es específica: cada anticuerpo reconoce y se une a un determinado antígeno. Su unión puede provocar:
Neutralización: se produce sobre toxinas y virus. El anticuerpo se une al antígeno e impide que se fije a las membranas celulares, neutralizando su acción.
Precipitación: se produce cuando el antígeno se encuentra disuelto, de forma que la unión antígeno-anticuerpo resulta insoluble y precipita.
Aglutinación: cada anticuerpo se une a dos antígenos y el resultado es la formación de un entramado de complejos antígeno-anticuerpo aglutinados. Facilita la acción de los fagocitos.
Opsonización: estimula la acción de los fagocitos.
Para esta prueba, en el laboratorio se utilizan suero de conejo. El conejo fue previamente inmunizado inyectándole la bacteria atenuada; su sistema inmune crea anticuerpos contra las salmonellas, entonces se extrae la sangre del conejo, y se purifica todo el contenido de inmunoglobulinas; esto es en laboratorios con equipo y métodos adecuados.
PROCEDIMIENTO
MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA.
Al paciente se le realiza una venopunción, extrayendo la sangre en un tubo sin anticoagulante y es centrifugada por 10 minutos a 3000 revoluciones por minuto. Se separa el suero el cual se utiliza para la determinación de los anticuerpos.
Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando:
Tífico "O" – Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0
Tífico "H" – Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0
NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.
1. Deposita en sitios diferentes de la placa una gota de suero (30 ul).
2. Agita el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.
3. Añade 30 ul de la suspensión de antígeno a cada una de los sueros. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul).
4. Mezcla el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.
5. Gira la placa manualmente o utiliza un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.
6. Realiza la lectura utilizando una fuente de luz directa y observa la aglutinación macroscópica.
7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara.
Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente forma:
Mililitros de suero
Dilución
0.08
1:20
0.04
1:40
0.02
1:80
0.01
1:160
0.005
1:329
INTERPRETACIÓN.
El informe del resultado de la prueba se hace tomando en consideración la dilución más alta que se observe en la reacción positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener títulos diagnósticos hasta los 8 días después de la fiebre.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.
2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos Proteus.
CUESTIONARIO
1. Menciones algunas características del género Salmonella.
__________________________________________________________________________________
2. ¿Dónde se localiza en antígeno "O"?
__________________________________________________________________________________________
3. ¿Dónde se localiza el antígeno "H"?
___________________________________________________________________________________________
4. Menciona otros métodos de laboratorio para el diagnóstico de salmonelosis.
________________________________________________________________________________________
5. Menciona algunas propiedades generales del género Brucella.
________________________________________________________________________________________
6. Esquematiza tus observaciones
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________
Práctica Nº 10
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 11
El shock anafiláctico
OBJETIVO
Que el alumno conozca la fisiopatología y síntomas de la anafilaxia inmediata
MATERIAL
2 conejos adultos
2 jeringas hipodérmicas de 10 ml
Solución al 5% de albúmina bovina
Solución al 5% de albúmina de huevo
Alcohol
Algodón
INTRODUCCIÓN
Las reacciones anafilácticas constituyen una urgencia clínica. Pueden conducir a una insuficiencia respiratoria, shock y muerte súbita.
La lista de causas potenciales de reacciones anafilácticas es muy grande:
Antibióticos.
Agentes diagnósticos y quimioterapeúticas.
Anestésicos.
Medicamentos.
Ciertos alimentos.
La anafilaxis es el resultado de la respuesta en dos fases del sistema inmunitario a un antígeno extraño:
a) En la primera de ellas, el contacto inicial con el antígeno determina la síntesis de una inmunoglobulina IgE específico para ese antígeno. A continuación, estos complejos antígeno-anticuerpo IgE específico se fijan a los mastocitos del tejido conectivo que rodean a los vasos sanguíneos y a los basófilos que circulan por la sangre. A partir de este momento la persona esta sensibilizada al antígeno.
b) La segunda fase se inicia cuando un antígeno frente a la cual la persona ha desarrollado sensibilidad logra penetrar nuevamente en su organismo a través de la piel, el tracto digestivo, o las vías respiratorias. La interacción del antígeno y el anticuerpo IgE a nivel de los mastocitos desencadena la liberación de una serie de mediadores químicos. Entre estos mediadores figura la histamina, sustancia que afecta numerosos tejidos y sistemas orgánicos, determinando en definitiva la respuesta fisiológica característica del paciente con una reacción anafiláctica.
La forma de aparición y la naturaleza de una reacción anafiláctica dependen de diversos factores:
La vía por la que el antígeno penetra en el organismo.
La cantidad de antígeno absorbido.
La velocidad de absorción.
El grado de hipersensibilidad de la persona.
Cuanto mas rápido se produce la reacción mas grave suele ser esta y por tanto, es importante reconocer los signos y síntomas de cara a una reacción inmediata.
Los signos y síntomas iniciales más comunes de la reacción anafiláctica son de tipo cutáneo, progresando típicamente desde prurito y eritema difuso a urticaria generalizada y edema vascular especialmente en los labios, párpados y lengua. También el paciente puede referir mucho calor.
Los trastornos respiratorios se inician con sensación de nudo en la garganta para seguir con ronquera, tos o estornudos, disnea y estridor. La úvula cuerdas vocales y parte posterior de la faringe pueden aparecer tumefactas. A la auscultación, se detectan sibilancias difusas.
A partir de este momento el paciente corre grave peligro por insuficiencia respiratoria por obstrucción de las vías respiratorias altas o bajas. Una complicación frecuente es el edema laríngeo. De hecho, la causa inmediata mas habitual de fallecimiento en los casos de reacción anafiláctica es la asfixia secundaria a edema laringe y broncoespasmos.
Los problemas cardiovasculares cuando aparecen durante una reacción anafiláctica, pueden dividirse en dos etapas. En primer lugar, el volumen plasmático disminuye de forma notable como consecuencia de una dilatación vascular, y la consecuente salida del líquido intravascular hacia el espacio extravascular, así pues, se puede observar:
Hipotensión, shock.
El hematocrito puede ser mayor de lo normal como resultado de una hemoconcentración.
Alteraciones electrocardiográficas como taquicardia, bradicardia e isquemia.
En la segunda fase de las complicaciones cardiovasculares puede aparecer depresión miocárdica.
Entre las alteraciones metabólicas figura un aumento de los niveles séricos de histamina, acidosis láctica y depleción de los factores de coagulación.
Los trastornos digestivos suelen ser infrecuentes, los signos y síntomas más habituales son náuseas, calambres abdominales, vómitos y diarrea intensa secundaria a los espasmos de la musculatura lisa.
La prioridad máxima es valorar inmediatamente el estado respiratorio del paciente:
Si ha dejado de respirar inicie reanimación respiratoria.
Si además carece de pulso, inicie reanimación cardiorrespiratoria.
Administrar oxigeno según necesidades.
Estar preparados para una intubación endotraqueal.
Si el edema laríngeo ha ocluido las vías respiratorias, el medico efectuara una traqueostomía de urgencia.
Insertar una vía intravenosa.
PREVENCIÓN DE LA ANAFILAXIS
Preguntar siempre acerca de posibles alergias cuando se elabore la historia del paciente.
Aparte de citar los alergenos responsables describa las características y la gravedad de las reacciones.
Destacar los antecedentes de alergia en la gráfica y en le plan de cuidados del paciente.
Siempre que se deba administrar algún medicamento que pueda desencadenar anfilaxis, preguntar al paciente si ha presentado alguna reacción y permanezca con el paciente y observar si aparecen manifestaciones de rechazo.
Tener cuidado con los medicamentos que son familia de los medicamentos de los cuales el paciente es alérgico (ANTIBIOTICOS). Por ejemplo los pacientes con antecedentes de sensibilidad a las penicilinas no deben ser tratados con cefalosporinas.
Todo paciente con riesgo a anafilaxis debe de ser advertido de la posible gravedad de este tipo de reacciones. Enseñarle las precauciones que debe de tomar.
PROCEDIMIENTO
a) Dosis sensibilizante
1. Una persona debe sujetar firmemente al conejo A y lo mantendrá con la posición en declive y con la cabeza hacia abajo.
2. Introduce la aguja bajo la piel, luego, levantando ligeramente la mano, debes forzar el paso de la punta de la aguja a través de la capa muscular y el peritoneo
3. Luego de ello, inocula 2.5 ml de solución de albúmina bovina.
4. Haz lo mismo con el conejo B; pero, en este caso inocula solución de albúmina de huevo
5. Deja en descanso a los conejos por espacio de 21 días
b) Dosis desencadenante
1. Inocula lentamente por vía cardíaca 3 ml de albúmina bovina al conejo A y al conejo B
2. Observa los resultados
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se diagnostica el shock anafiláctico en una persona?
__________________________________________________________________
2. ¿Qué tratamiento se debe dar en estos casos?
____________________________________________________________________________________________________________
3. ¿Qué tipos de hipersensibilidad conoces? Descríbelos
__________________________________________________________________________________________________________________
4. En la práctica. ¿Por qué se hizo la primera inoculación a los conejos?
________________________________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué observaste cuando se hizo la segunda inoculación a los conejos?
______________________________________________________________________________________________________________
6. ¿A qué se debe ello?
_________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
________________________________________________________________________________
Práctica Nº 11
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 12
Estudio parasitológico
OBJETIVO
Que el alumno conozca la morfología de las diferentes estructuras de los parásitos
MATERIALES
Materia fecal
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Palitos mondadientes
Solución lugol
Solución salina fisiológica
Microscopio
INTRODUCCIÓN
PARASITISMO INTESTINAL
Este término define la infección del tracto gastrointestinal por organismos que se aprovechan de los nutrientes del cuerpo humano donde cumplen su ciclo vital. Existen muchos parásitos causantes de síntomas en el ser humano. De una manera simplificada podemos agrupar los parásitos intestinales más comunes en dos grupos:
1) Protozoarios (microscópicos): Amebas, Giardia y Criptosporidium.
2) Helmintos ("gusanos"): Oxiuro, Ascaris, Tricocéfalo, Ancylostoma, Necator, Strongyloides y Toxocara.
El mecanismo de contagio varía dependiendo de cada parásito. La mayoría de ellos se adquieren al ingerir agua o alimentos contaminados con sus quistes o huevos; otros penetran a través de la piel, cuando la persona o el niño camina descalzo sobre la tierra.
Los síntomas producidos por los parásitos dependerán del organismo causante y en muchas ocasiones no se presenta ninguna molestia. Los parásitos protozoarios causarán síntomas predominantemente intestinales (diarrea, distensión y dolor abdominal); en cambio los helmintos, además de producir los mismos síntomas, pueden ocasionar molestias generales o en otros órganos y sistemas (debilidad, palidez, pérdida de peso, deficiencias nutricionales progresivas, anemia, tos crónica, picazón anal).
El diagnóstico se logra mediante la visualización de quistes o huevos en exámenes de heces, aunque ocasionalmente se pueden observar los parásitos en estudios radiológicos intestinales o en colonoscopias. En otras ocasiones se observan en las heces o en las márgenes del ano.
El tratamiento que se recomienda contra los protozoarios se basa en el uso de diversos medicamentos, tales como: Secnidazol, Tinidazol, Metronidazol y Diodohidroxiquinolina.
Para el tratamiento de las helmintos disponemos de diversos anti-helmínticos de amplio espectro efectivos, tales como: Albendazol, Mebendazol y Pirantel, que permiten eliminar diferentes variedades de parásitos con pocas dosis.
En muchas ocasiones los síntomas se deben a una infección mixta, bacteriana y parasitaria, por lo que se requerirá tratamiento anti-parasitario y antibiótico conjunto. En otras ocasiones son causados por varios parásitos y requieren tratamientos con medicamentos anti-protozoarios y anti-helmínticos conjuntos.
PROCEDIMIENTO
1. Para trabajar con materia fecal es recomendable que utilices mascarilla y guantes quirúrgicos.
2. En una lámina portaobjetos, coloca en uno de sus extremos una gota de solución salina fisiológica y en el otro extremo una de lugol
3. Utiliza un mondadientes y coge una fracción de materia fecal
4. Mezcla con la gota de solución salina, formando una película delgada y homogénea. No debes hacer frotices gruesos, porque no permiten visualizar.
5. Haz la misma operación mezclando con la solución de lugol.
6. Coloca una laminilla cada preparación, cuidando de que no se formen burbujas
7. Examina al microscopio a 10X y 40X
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué elementos orgánicos está formado la materia fecal humana?
________________________________________________________________
2. Para diagnosticar protozoarios ¿Qué debes encontrar en la muestra de estudio?
____________________________________________________________________________________________________________
3. Para diagnosticar helmintos ¿Qué debes encontrar en la muestra de estudio?
__________________________________________________________________________________________________________________
4. En la práctica. ¿Por qué se hizo la primera mezcla en solución salina fisiológica y no en lugol?
________________________________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué estructuras de parásitos observaste en la práctica?
______________________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
__________________________________________________________
Práctica Nº 12
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 13
Estudio parasitológico: protozoarios intestinales
OBJETIVO
Que el alumno conozca la morfología de los trofozoitos y quistes de los protozoarios
Que sepa diferenciar los diferentes estadios de los protozoarios
MATERIALES
Materia fecal diarreica
Materia fecal fresco de cerdo
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Palitos mondadientes
Solución lugol
Solución salina fisiológica
Láminas con preparados permanentes de: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, Cryptosporidium sp.
Microscopio
INTRODUCCIÓN
Los protozoarios son organismos unicelulares. No son visibles al ojo desnudo pero pueden ser vistos bajo el microscopio. Un espécimen de excremento fresco es requerido para encontrar a estos parásitos.
El ciclo de vida de los protozoarios es complicado. Básicamente, la infección resulta de la ingestión en forma de quiste u ooquiste). Los quistes invaden el recubrimiento de los intestinos donde maduran a formas adultas y son expelidos en las heces. Bajo condiciones favorables se desarrollan a la forma infecciosa.
Algunos absorben el alimento a través de sus membranas celulares. Otros, como las amibas, rodean el alimento y lo engullen. Otros tienen aberturas llamadas poros bucales, con los cuales barren el alimento. Todos los protozoarios digieren su alimento dentro de compartimientos similares a estómagos llamados vacuolas.
Las amibas son células muy fluidas que se movilizan extendiendo partes de sus células como seudópodos o "pies falsos". Otros protozoarios como Giardia se impulsan agitando estructuras llamados flagelos similares a pelos largos. Otros, como Balantidium, nadan batiendo proyecciones similares a pelos cortos llamados cilios en un patrón rítmico similar al que producirían muchos minúsculos remos.
La gran mayoría de protozoarios no hacen ningún daño. Pero, sí hay algunos que causan enfermedad. Un tipo de amiba, Entamoeba histolytica, que puede vivir en el intestino humano se alimenta de las células sanguíneas rojas y causa disentería. El protozoario parásito Cryptosporidium parvum afectó a 400.000 personas en Milwaukee cuando contaminó el agua del acueducto en 1993. Otra amenaza protozoaria más conocida es la Giardia lamblia, que causa diarrea y mal absorción intestinal.
PROCEDIMIENTO
1. No olvides de usar mascarilla y guantes quirúrgicos.
2. Para que prepares las muestras en fresco de materia fecal diarreica y del cerdo, sigue el mismo procedimiento de la práctica anterior.
3. Examina al microscopio a 10X y 40X
4. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude sólo al tornillo micrométrico y gradúa el espécimen
5. Observa el trofozoito de E. histolytica, e identifica la forma, el ectoplasma, endoplasma, las vacuolas y el núcleo.
6. Haz la misma observación con los trofozoitos de Giardia y Balantidium.
7. Cuando observes los quistes de los 3 protozoarios, incide en su forma y el número de núcleos. Ahora, observa el ooquiste de Cryptosporidium.
CUESTIONARIO
1. ¿En qué se diferencia el trofozoito de E. histolytica que es patógena, con el trofozoito de E. coli, que es comensal?
________________________________________________________________
2. ¿Por qué se dice que Cryptosporidium es un parásito emergente?
_____________________________________________________________
3. Se dice que Giardia lamblia causa el síndrome de mal absorción ¿A qué se debe esta afirmación?
__________________________________________________________________________________________________________________
4. ¿Qué diferencia(s) existe(n) entre un quiste y un ooquiste?
________________________________________________________________________________________________________________
5. Balantidium es causante de una zoonosis ¿Por qué se dice así?
______________________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
_____________________________________________________________
Práctica Nº 13
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 14
Estudio parasitológico: protozoarios hemáticos, tisulares y urogenitales
OBJETIVO
Que el alumno conozca la morfología de los trofozoitos y formas evolutivas de los protozoarios hemáticos y tisulares
Que sepa diferenciar los diferentes estadios de estos protozoarios
MATERIALES
Viales con solución salina fisiológica
Una paciente con tricomoniasis vaginal
Láminas portaobjetos
Lancetas estériles desechables
Hisopos estériles
Láminas con preparados permanentes de: Trypanosoma cruzi, Toxoplasma gondii, Leishmania braziliensis, Plasmodium vivax, Trichomonas vaginalis.
Microscopio
INTRODUCCIÓN
Trypanosoma cruzi es un protozoario hemático, donde se encuentra en forma de tripomastigote: tiene aspecto fusiforme, de unas 20 micras, con un solo flagelo largo, membrana ondulante y presencia de kinetoplasto que protusiona en el extremo opuesto al flagelo. Es un parásito que requiere dos hospedadores para su desarrollo completo, uno vertebrado (el hospedero definitivo) y otro invertebrado (el vector). En la chinche ingresa el parásito en forma de tripomastigote en el momento de la succión, para adquirir -en el intestino medio- la forma de epimastigote; finalmente, cuando alcanza la ampolla rectal, recupera la forma de tripomastigote metacíclico o infectivo. Ninguna de las formas de tripomastigote se multiplica, mientras que epimastiogtes y amastigotes lo hacen por fisión binaria.
Las Leishmanias, son protozoarios que pertenecen a la familia Trypanosomatidae. Morfológicamente todas las especies son similares, con diferencias en el comportamiento biológico, inmunológico, tipo de enfermedad y distribución geográfica. En el hospedero vertebrado afecta el sistema reticuloendotelial y se presenta intracelular en forma de amastigote. Este es ovalado o redondeado, inmóvil, de 2 a 5 micrones. El núcleo es voluminoso, esferoidal y central y cerca está el quinetoplasto, el cual se colorea intensamente y tiene forma de barra, asociado a un rudimento de flagelo que no se extiende fuera del parásito.
Las cuatro formas de paludismo humano pueden ser tan semejantes respecto a sus síntomas iniciales que dificulten su diferenciación por especies, sin estudios de laboratorio. Aún más el patrón febril de los primeros días de la infección se asemeja al que se observa en las etapas incipientes de otras enfermedades bacterianas, víricas y parasitarias. Incluso demostrar la presencia del parásito no significa obligadamente que el paciente tiene paludismo (puede haber también fiebre amarilla, de Lassa y otras más en sus comienzos). La forma más grave, que el paludismo por P. falciparum (terciana maligna), puede mostrar un cuadro clínico muy variado que incluye fiebre, escalofríos, sudores y cefalalgia, y evolucionar a ictericia, defectos de coagulación, choque, insuficiencia renal y hepática, encefalopatía aguda, edema pulmonar y cerebral, coma y muerte. Es causa posible de coma y otros síntomas del sistema nervioso central como la desorientación y el delirio, en cualquier persona que haya retornado, recientemente de una zona tropical, El tratamiento rápido es esencial, incluso en los casos leves, porque pueden aparecer en forma repentina complicaciones irreversibles; en los niños no tratados y en los adultos no inmunes la tasa de letalidad excede considerablemente del 10%.
Examen de sangre
La preparación de buenas extensiones sanguíneas dependerá en gran medida de la pulcritud de los portaobjetos, así como del resto del material analítico, que debe de estar perfectamente lavado en alcohol y secado, antes de preparar la extensión. Para preparaciones permanentes se debe utilizar material nuevo.
 Página anterior | Volver al principio del trabajo | Página siguiente  |