La preparación de sangre fresca debe ser suficientemente delgada para que no queden los parásitos enmascarados por las células sanguíneas. Se coloca una gota en un porta (pudiendo diluirse con suero salino) y se tapa con cubre para evitar la coagulación. El análisis de sangre fresca es práctico para la detección de trypanosomas y microfilarias, por su característica forma de moverse. Los trypanosomas se ven con un objetivo potente y poca iluminación. Las microfilarias se detectan con bajos aumentos. El movimiento en vivo de los parásitos atrae la atención del observador facilitando el trabajo. Pero para su determinación específica es necesario realizar una posterior tinción permanente.
Para el estudio de parásitos de la Malaria, Trypanosomas, Filarias y otros, se deben de hacer frotis, tanto finos como gruesos.
Frotis: Es una capa de células sanguíneas regularmente distribuidas. Los frotis delgados producen poca distorsión en la estructura morfológica de los parásitos. Se usan para detectar la malaria, tripanosomas y microfilarias. Si la película de sangre es demasiado gruesa no se ve la estructura del parásito.
Los frotis gruesos, aunque producen la distorsión de los parásitos, permiten analizar mayor cantidad de sangre y aumentan la probabilidad de detectarlos, haciendo el análisis tres veces más rápido. Sin embargo, si se hacen mal resultan inútiles.
PROCEDIMIENTO
Es preferible emplear sangre periférica (lóbulo de la oreja, yema del dedo) eliminando previamente con alcohol la grasa de la piel. La incisión debe ser limpia y profunda, sin que se precise apretar la herida para que sangre. La extensión debe de ser rápida para evitar la coagulación. Es preferible la sangre arterial pues la venosa distorsiona los resultados.
Frotis delgado:
1. No olvides de usar guantes quirúrgicos como medida de bioseguridad.
2. Haz la incisión en la yema del dedo, tal como se te recomienda al inicio
3. Coloca una gota de sangre a 2 cms del extremo de la lámina portaobjetos
4. con el borde de otro porta contacta con la gota de sangre y deja que se extienda la sangre por la línea de contacto.
5. Desplaza el segundo porta sobre el primero con una inclinación de 30º haciendo una extensión uniforme y fina. Deja secar al aire y tiñe.
Frotis grueso:
1. Sigue los pasos 1, 2 y 3 del proceso anterior
2. Con la esquina de otro porta se extiende la sangre con movimiento circular y un diámetro de 15 mm.
3. Deja secar y tiñe con Giemsa 1:50
Observación de láminas coloreadas
1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude sólo al tornillo micrométrico y gradúa el espécimen
2. Observa el trofozoito de T. cruzi, e identifica la forma, núcleo, flagelo y membrana ondulante. Ahora, observa los nidos de amastigotas.
3. Haz la misma observación con los amastigotas y promastigotas de Leishmania.
4. Ahora, observa las formas de Plasmodium vivax.
Observación de Trichomonas vaginalis:
1. Haz un preparado en fresco con el hisopo conteniendo la secreción vaginal y cúbrelo con una laminilla
2. Observa a 10X y luego a 40X, busca formas móviles del protozoario.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué diferencias observas entre las diferentes fases evolutivas de Trypanosoma?
__________________________________________________________________________________________________________________________
2. ¿Qué es lo que hace el Plasmodium en el interior del organismo humano?
_______________________________________________________________
3. Se dice que Leishmania es causante de la úlcera cutánea ¿Qué enfermedades producen L. donovani y L. tropica?
_________________________________________________________________________________________
4. ¿Por qué T. vaginalis causa síntomas sólo en las mujeres?
________________________________________________________________________________________________________________
5. Menciona los diferentes vectores que transmiten a los parásitos hemáticos y tisulares
______________________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
___________________________________________________________
Práctica Nº 14
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 15
Estudio parasitológico: los trematodos
OBJETIVO
Que el alumno conozca la morfología de los tremátodos y sus formas evolutivas.
Que sepa diferenciar los diferentes estadios de estos parásitos
MATERIALES
Muestras de hígado con fascioliosis
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Bisturí
Láminas con preparados permanentes de: Fasciola hepatica, Paragonimus sp, Schistosoma mansoni, Echinostoma. Fases evolutivas de huevo, miracidio, redia, cercaria y metacercia
Microscopio
Estereoscopio
INTRODUCCIÓN
Los trematodos o duelas, son una clase de platelmintos parásitos internos y externos, tanto de vertebrados como invertebrados. Poseen ganchos o ventosas en su parte ventral para sujetarse a las víctimas; su adaptación parásita se ha traducido en una ausencia de órganos sensoriales, tales como los ojos. Aunque son hermafroditas y se da la autofecundación, algunos como los Schistosomas presentan macho y hembra. En los trematodos del orden digenéticos, durante sus diferentes estados larvarios ocupan otros tantos hospederos diferentes (generalmente invertebrados), para después vivir en un hospedero definitivo durante su etapa adulta (generalmente vertebrados). Las duelas suelen vivir en el intestino y otras cavidades del cuerpo de otros animales (también en la sangre). Se defienden de la acción de los jugos digestivos de sus hospederos, mediante una cutícula muy resistente que reviste su superficie corporal.
Peligros en el laboratorio
Pueden encontrarse estadios infectivos de Schistosoma spp, (cercarla) y Fasciola spp. (metacercaria) en el agua o enquistados en plantas acuáticas en acuarios que se utilizan en los laboratorios para mantener caracoles marinos, como hospederos intermedios. La penetración de cercaria de Schistosoma por la piel y la ingestión accidental de metacercaria son los peligros primarios. La disección o el aplastamiento de caracoles infectados con Schistosoma puede provocar la exposición de la piel o membranas mucosas a gotas conteniendo cercarias; además, la metacercaria puede ser transferida inadvertidamente de las manos a la boca por los dedos o guantes tras el contacto con la vegetación acuática contaminada o superficies de acuarios.
Las tres formas más evidentes de combatir la esquistosomiasis son: practicas higiénicas adecuadas, tratamiento de los huéspedes infectados y eliminación de los caracoles. Existe tratamiento seguro y efectivo para la mayoría de las infecciones provocadas por trematodos.
Los trematodos tienen un ciclo biológico con diferentes fases que se representan en la figura 1.
Figura 1.
Ciclo biológico de los Trematodos
PROCEDIMIENTO
Siempre debes utilizar guantes
1. Con el bisturí, haz cortes del hígado y con una pinza quita un espécimen adulto de Fasciola, observa su forma, color, tamaño
2. Luego, con el mismo bisturí secciona a la Fasciola aproximadamente a nivel de la ventosa ventral.
3. Con un mondadientes raspa la zona seccionada sobre una gota de lugol contenido en una lámina portaobjetos
4. Cúbrelo con una laminilla y examina al microscopio a 10X, verás gran cantidad de huevos del parásito, observa su tamaño y color.
Observación de láminas coloreadas
1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude sólo al tornillo micrométrico y gradúa el espécimen
2. Observa los adultos coloreados de Fasciola, Paragonimus, Schistosoma y Echinostoma, haz diferencia entre las estructuras internas de estos adultos.
3. Realiza la misma observación con las formas evolutivas: miracidio, redia, cercaria y metacercaria.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué diferencias observas entre las diferentes fases evolutivas de Fasciola?
________________________________________________________________
2. Menciona en qué lugares del cuerpo humano se ubican los adultos de los tremátodos estudiados
_______________________________________________________________
3. Los huevos que has separado de los adultos de Fasciola ¿son infecciosos para el hombre? Explica
__________________________________________________________________________________
4. ¿De qué manera causa infección Schistosoma mansoni en el hombre?
____________________________________________________________________________________
5. ¿Qué medidas preventivas das para evitar la infección con tremátodos?
______________________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
________________________________________________________
Práctica Nº 15
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 16
Estudio parasitológico: los cestodos
OBJETIVO
Que el alumno conozca la morfología de los cestodos y sus formas larvarias.
MATERIALES
Muestras de hígado con hidatidosis
Muestras conservadas de adultos de tenias
Materia fecal
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Bisturí
Láminas con preparados permanentes de estructuras de: T. saginata, T. solium, Hymenolepis, Echinococcus, Dypilidium, Diphyllobothrium.
Microscopio
Estereoscopio
INTRODUCCIÓN
Los cestodos o tenias son platelmintos hermafroditas con el cuerpo segmentado y desprovisto de tubo digestivo, ya que se alimentan directamente por ósmosis de los nutrientes existentes en el intestino del hospedero. El cuerpo de las tenias adultas, llamado estróbilo, aplanado dorsoventralmente, está formado por una serie de segmentos, anillos o proglótides (de 3 a 4.000), tanto más grandes y maduros cuanto más disten del escólex o cabeza, provisto de una serie de ventosas o ganchos mediante los que se adhieren. En función del número de anillos se diferencia en inmaduros y maduros o grávidos. Las tenias, hasta llegar al estado adulto, pueden pasar por diversas fases en un solo hospedero (Hymenolepis nana) o, lo que es más frecuente, en diversos hospederos intermediarios, que son específicos para cada cestodo. Estas fases son:
Huevo o embrióforo.
Oncósfera o embrión hexacanto.
Larva que según la especie puede ser: Cisticerco, Cisticercoide, Cenuro, Hidátide, Procercoide, Plerocercoide.
Adulto.
El hombre puede ser parasitado por cestodos adultos y en este caso, es el hospedero definitivo, fijándose a la pared intestinal. El hombre también puede ser parasitado por formas en estado larvario y en este caso es hospedero intermediario, y las larvas pueden tener diversas localizaciones: hígado, pulmón, músculos, ojos, etc.
Las tenias presentan distintos tipos de ciclos biológicos que se representan en las figuras 1, 2 y 3.
Las infecciones producidas por cestodos son debidas a Echinococcus granulosus, Taenia solium e Hymenolepsis nana. La vía de penetración en el organismo es por ingestión de huevos infectivos de E. granulosus o T. solium. H. nana es un parásito cosmopolita que no requiere de un hospedero intermediario y que se transmite directamente por ingestión o bien a través de heces infectadas de humanos o roedores.
Figura 1
Ciclo biológico de Taenia saginata
Figura 2
Ciclo biológico de Taenia solium
Figura 3
Ciclo biológico de Hymenolepis nana en las heces de humanos, que son el hospedero definitivo de estos parásitos.
Precauciones recomendadas
Se recomienda el uso de guantes para las operaciones que puedan implicar el contacto con heces o con superficies contaminadas con heces frescas procedentes de perros infectados con E. granulosus, de heces procedentes de humanos infectadas con T. solium y heces de humanos o roedores infectados con Hymenolepsis nana.
PROCEDIMIENTO
Siempre debes utilizar guantes
1. Prepara láminas portaobjetos con muestras de heces como ya sabes hacerlo
2. Observa al microscopio a 10X y 40X buscando huevos de cestodos, grafícalos.
Observación de láminas coloreadas
1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude sólo al tornillo micrométrico y gradúa el espécimen
2. Observa las diferentes formas de escólex de las tenias estudiadas, grafícalos.
3. Realiza la misma observación con los proglótidos grávidos de las tenias mostradas, grafícalos.
4. Observa el espécimen adulto de Echinococcus, grafícalo
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las formas larvarias de los cestodos estudiados? Y ¿Cuáles pueden estar como tales en el hombre?
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2. ¿Por qué es difícil eliminar los adultos de las tenias del tracto intestinal?
_______________________________________________________________________________________________________________________
3. ¿Qué es la neurocisticercosis humana?
__________________________________________________________________________________________________________________
4. ¿De qué manera causa infección Diphyllobothrium en el hombre?
________________________________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué medidas preventivas das para evitar la infección con céstodos?
______________________________________________________________________________________________________________
OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
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Práctica Nº 16
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
PRÁCTICA Nº 17
Estudio parasitológico: los nematodos
OBJETIVO
Que el alumno esté en condiciones de conocer y diferenciar la morfología de los nematodos.
MATERIALES
Materia fecal
Láminas portaobjetos
Láminas cubreobjetos
Especimenes adultos de Ascaris y Toxocara conservados
Láminas con preparados permanentes de adultos de: Trichuris, Enterobius, Uncinarias.
Microscopio
Estereoscopio
INTRODUCCIÓN
Los nematodos (de nemas, hilo, y oedes, similar, parecido) son gusanos filiformes, con un extremo anterior provisto de papilas, ganchos, placas o dientes (para fijarse en los tejidos o abrirse paso en ellos), y otro posterior, de morfología variable. Algunas especies de nematodos son vivíparas (triquina) u ovivíparas (Strongyloides), pero la mayoría son ovíparas.
Los nematodos tienen diferentes tipos de ciclos vitales. La mayoría de ellos tienen un hospedero definitivo, y se produce la transmisión a otro por ingestión de huevos o de larvas, penetración de éstas a través de la piel o las mucosas, o bien a través de un hospedero intermediario (artrópodo), en el que sufre un ciclo más o menos complicado. Los huevos eliminados por las heces, orina, esputo y piel se convierten en larvas, que presentan diversas mudas o fases hasta invadir al nuevo hospedero. En algunas especies, el huevo es la única forma infectante.
Se han descrito casos de infecciones asociadas al laboratorio con Ascaris, Strongyloides y Enterobius. Para aquellas personas que están sensibilizadas pueden representar un riesgo las reacciones alérgicas a diferentes componentes antagónicos de los nematodos, como por ejemplo antígenos en forma de aerosol de Ascaris. No se conocen infecciones asociadas con animales de laboratorio, incluidos los artrópodos, pero las larvas infectivas de Strongyloides contenidas en las heces de primates no homínidos, representan un peligro potencial de infección para los cuidadores de animales y personal de laboratorio.
Los huevos y larvas en las heces frescas de hospederos infectados, en general, no son infecciosos. El desarrollo a etapas infecciosas puede transcurrir en períodos de un día a varias semanas. La ingestión de huevos infectados o la penetración a través de la piel de larvas infectivas representan el principal peligro.
Los artrópodos infectados con filarias representan un peligro potencial para el personal de laboratorio. En este colectivo, con exposiciones repetidas a antígenos de Ascaris en forma de aerosol, es frecuente desarrollar hipersensibilidad.
PROCEDIMIENTO
Siempre debes utilizar guantes
1. Prepara láminas portaobjetos con muestras de heces como ya sabes hacerlo
2. Observa al microscopio a 10X y 40X buscando huevos de nematodos, grafícalos.
Observación de láminas coloreadas
1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude sólo al tornillo micrométrico y gradúa el espécimen
2. Observa los adultos de los diferentes nematodos, grafícalos.
3. Observa el espécimen adulto de Ascaris y Toxocara, grafícalos
CUESTIONARIO
1. ¿Por qué se dice que los nematodos son geohelmintos?
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2. ¿Qué acciones patológicas puede causar Ascaris en el organismo humano?
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3. ¿Qué es la anquilostomiasis y cómo se adquiere?
__________________________________________________________________________________________________________________
4. ¿Qué parásito causa la elefantiasis y de qué forma el hombre adquiere la infección?
________________________________________________________________________________________________________________
5. ¿Qué medidas preventivas das para evitar la infección con nematodos?
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OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
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Práctica Nº 17
Nombre del Alumno:_________________________________ Grupo______
Profesor de Laboratorio____________________________ Calif:________
Bibliografía
1. Atías, A. Parasitología Clínica. 4ª Edición. Editorial El Mediterráneo. Santiago – Chile. 1998
2. Cortés, J. Manual de prácticas de Microbiología. Cualquiera de estas prácticas se puede hacer perfectamente en un laboratorio de instituto. URL: http://www.joseacortes.com/practicas/
3. Cortés El Microscopio óptico compuesto. Práctica de laboratorio: Manejo y uso del microscopio óptico compuesto. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm
4. Gaitán, MA, Manual de prácticas de Bacteriología General, Facultad de Ciencias Químicas, Universidad de Colima. 1997
5. gráficos obtenidos de: http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm
6. Koneman EW, et.al. Diagnóstico Microbiológico, Panamericana, quinta edición, México. 1994
7. Las tinciones – Monografias.com. Tinción Simple: utiliza un solo colorante. Tinción de Gram: URL: www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones
8. Mandell/ Douglas/ Bennet. "Enfermedades Infecciosas, principios y práctica " 4º Edición., Editorial Panamericana 1995.
9. Martínez, R. Manual de Prácticas de Microbiología General, Centro de Graduados e investigación, Instituto Tecnológico de Veracruz, l993.
10. NN. http://html.rincondelvago.com/biologia_41.html
11. NN. http://html.rincondelvago.com/tincion-de-gram.html
12. Pelczar, M, et.al, Elementos de Microbiología, McGraw-Hill, México. 1995.
13. Quero, A. Parasitología. Departamento de Biología de Organismos y Sistemas (BOS). http://www.uniovi.es/bos/Asignaturas/Parasit/
14. Ríos, A. Parasitología. Tabasco – México. 2000. URL: /trabajos12/paras/paras
15. Torres, M. Parasitología para Enfermería. Pontificia Universidad Católica de Chile. 2001. http://escuela.med.puc.cl/paginas/udas/Parasitologia/Parasitol_03.html
16. Zinsser, Microbiología, Editorial Médica Panamericana, 18º edición, México. 1990
Autor:
Miguel Salvador
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