Fundamento: Las pruebas de laboratorio se basan en la medición de la actividad enzimática sobre un sustrato de almidón que constituye el reactivo con el cual se enfrenta la enzima presente en la muestra, el almidón es degradado a glucosa y esa degradación es proporcional a la actividad de la amilasa.
Reactivo necesario:
Reactivo diagnóstico para la determinación de amilasa en fluidos biológicos.
Aparatos, utensilios y medios de medición
Tubos plásticos de 10 ml graduados de centrífuga.
Tubo para ensayo de 13 x 100 ó 15 x 125 mm.
Gradilla para los tubos de ensayos.
Pipetas graduadas de 5 ml, 10 ml.
Probeta graduada de 2000 ml.
Centrífuga.
Fotocolorímetro.
Muestra: Orina de micción espontánea o muestras de orina de 24h. La prueba se puede realizar en una micción aislada, pero los resultados son más confiables si se emplea en orina de 2h. Por lo general se realiza conjuntamente con la cuantificación de amilasa sanguínea con el objetivo de comparar los resultados.
En este examen en particular la orina de 24 h no debe e tener conservantes, ya que la alfa amilasa es inestable en la orina ácida. Realizar el test de inmediato o alcalinizar las muestras para su almacenamiento a pH 7.0. Las muestras conteniendo precipitado deben centrifugarse antes de efectuar el test.
FASE ANALITICA
1. Medir volumen de orina de 24 previa homogenización.
2. Centrifugar 10ml de orina a 1500 rpm por 5 min ó filtrar la orina. No pipetear con la boca, evitar el contacto de reactivo con la piel porque la saliva y el sudor contiene alfa amilasa.
3. Llevar la muestra al departamento de bioquímica para procesarla en el equipo Hitachi o fotocolorímetro.
4. Cálculos:
Resultado en mmol/l x Volumen de la muestra expresado en litros
* (si la actividad de la alfa amilasa es muy elevada se hace necesario diluir la muestra para su proceder e incluir el factor de dilución (FD) para realizar los cálculos).
Resultado en mmol/l x Volumen de la muestra expresado en litros. FD.
FASE POSTANALITICA
Informe de los resultados:
Amilasa en orina de 24h: U/24h.
Amilasa en muestras de micción espontánea: U/l.
VALORES DE REFERNCIA:
Orina de 24h: Menor o igual que 410 U/24h.
Orina espontánea: menor que 460 U/l.
Fuentes de Error
1. No homogenizar bien las muestras de orina
2. Nivel de adiestramiento del técnico
3. Limpieza de la cristalería (con restos de sangre).
4. Mala conservación de la muestra.
5. No realizar correctamente la dilución.
6. Error en los cálculos.
7. Mal manejo y calibración del equipo.
8. Reactivos vencidos.
18- DEPURACIÓN O ACLARAMIENTO DE CREATININA.
FASE PREANALITICA
INTRODUCCION
La creatinina se forma por la deshidratación de la creatina, en el transcurso del metabolismo energético muscular, a un ritmo constante y depende de la masa muscular del individuo, por lo que la producción de creatinina endógena se mantiene constante mientras la masa muscular se mantenga de la igual forma. La totalidad de la creatinina producida es filtrada por el glomérulo y se elimina disuelta en la orina, por lo que constituye un índice muy seguro de la capacidad de filtración glomerular.
Este exámen constituye la prueba de función renal glomerular y su disminución representa una pérdida de la función de filtración del riñón (glomérulos renales).
El término aclaramiento plasmático (filtración glomerular) indica la capacidad de los riñones para eliminar diversas sustancias del plasma. Ej. Si el plasma que atraviesa los riñones contiene 0,1 g de una sustancia por 100 ml y 0,1g de esa sustancia pasa a la orina cada minuto, los 100 ml de plasma quedarán limpios, desprovistos o aclarados de esa sustancia por minuto.
Objetivo: Describir el procedimiento para la determinación del aclaramiento plasmático teniendo en cuenta la relación entre las concentraciones de creatinina en sangre y orina del paciente, así como su superficie corporal para expresar el aclaramiento absoluto.
Fundamento: Se basa en el método JAFFE- CINETICO descrito para la determinación de creatinina y se procede a calcular el aclaramiento plasmático teniendo en cuenta la superficie corporal del paciente.
Muestra: Sangre venosa del paciente y orina de 24 h.
Se requiere además de otros datos imprescindibles como: Peso en kg, talla en metros, sexo, edad y raza del paciente.
Fórmula del aclaramiento de Creatinina.
FG absoluto = Creat. Orina x V/ min. (Se expresa en ml / min).
Creat. Suero
FG corregido = Creat. Orina x V/ min x 1.73. (Se expresa en ml / min/ m2)
Creat. Suero S.C
S.C = Talla0.725 (cms) x Peso0.425 (Kg.) x 71.84.
10 000
Creat. Orina: Resultado de la concentración creatinina en orina (umol/L) x Factor de dilución (100) x Volumen total de la orina en litros.
Creat. Suero: Resultado de la concentración de creatinina en suero (umol/l)
S.C: Superficie corporal (m2). La superficie corporal del paciente (SC) se calcula mediante un normograma
Fórmula de Cockcroft y Gault.
Filtrado glomerular absoluto.
FG = (140 – edad en años) x Peso (Kg) x FS (Se expresa en ml / min).
0.818 x Creatinina en suero
FS Si Femenino = 0.85 Si masculino = 1
Filtrado glomerular corregido
FG = FG x 1.73 / SC (Se expresa en ml / min/ m2)
En nuestro medio la determinación de creatinina (tanto sérica como urinaria) se realiza en el departamento de bioquímica en el analizador químico o fotocolorímetro utilizando el método automatizado de JAFFE CINÉTICO.
FASE A NALITICA
MARCHA ANALÍTICA
1-Homogenizar la orina recolectada en 24 horas
2-Medir volumen total de la orina
3-Diluir la muestra homogenizada de orina de la siguiente forma. 20 ul de orina + 1980 ul de agua destilada (1:100)
4-Enviar al departamento de química dicha dilución de la orina perfectamente identificada para la determinación de creatinina. Resultado en umol /l
5- La muestra de sangre se enviará directamente al departamento de química para la determinación de creatinina. Resultado en umol/l
6-CÁLCULOS
a) Se calcula V/min (volumen minutado) de forma similar al conteo de addis.
VM= Cantidad de orina / 1440 min de 24 horas
b) Creatinina en orina: Resultado de la concentración creatinina en orina (umol/L) x Factor de dilución (100) x Volumen total de la orina en litros.
c) Creatinina sérica: Resultado se informará en umol//
d) UPC = CO
CS
UPC: Cociente creatinina en orina / creatinina en suero. No se informa en unidades.
CO: Resultado de la concentración creatinina en orina (umol/L) x Factor de dilución (100) x Volumen total de la orina en litros.
CS: Resultado de la concentración de creatinina en suero (umol/l).
FASE POSTANALITICA
VALORES DE REFERENCIA
VM = 0.95 -3 ml /minutos
CREATININA EN ORINA
Orina (24 h)
Hombres: 9 -21 mmol/24 h ó 9000 – 21 000 &µmol/l.
Mujeres: 7 -14 mmol/24 h ó 7000 – 14 000 &µmol/l.
CREATININA SÉRICA = 44 – 126 &µ mol/l
FGC = 60 – 152 ml/min/ m2
Fuentes de Error:
1. No homogenizar bien las muestras de orina
2. Nivel de adiestramiento del técnico
3. Limpieza de la cristalería (con restos de sangre).
4. Mala conservación y recolección de la muestra.
5. No realizar correctamente la dilución.
6. Error en los cálculos.
7. Mal manejo y calibración del equipo.
8. Reactivos vencidos.
IONOGRAMA URINARIO (NA Y K EN ORINA DE 24 HORAS)
FASE PREANALITICA.
INTRODUCCION: El sodio es el principal catión del líquido extracelular y el factor determinante de la osmolalidad plasmática: los cambios de la concentración plasmática de sodio se acompañan de cambios más o menos rápidos e importantes en la cantidad de agua que pasa hacia el interior o el exterior de las células, lo que da lugar a las alteraciones del volumen extracelular.
El potasio es el principal catión intracelular y su metabolismo mantiene estrecha relación con la función de la célula. La principal función del potasio en el organismo es la regulación de la excitabilidad de algunas células, y son los trastornos de los tejidos excitables los que pueden causar problemas médicos serios.
Objetivos: Cuantificar sodio y potasio en muestras de orina de 24h.
Fundamento: Se basa en el principio de la potenciometría que consiste en la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en una solución bajo condiciones de corriente cero.
Equipo necesario: Gasómetro, centrífuga.
Instrumentos necesarios: Cristalería para medir el volumen de la muestra de medición.
Muestra: Se realiza en muestra de orina de 24h.
FASE ANALITICA
1. Medir el volumen urinario de 24 horas previa homogenización de la muestra.
2. Llevar un tubo de ensayo con 15 ml de orina, centrifugada al departamento de gasometría.
3. Deseche el resto de la orina.
4. En la sección de gasometría se hará la dilución pertinente para cada ión (K y Na). Se realizará en equipo de ión selectivo basado en el principio de la potenciometría.
Cálculo
En caso de realizarse en orina de 24h el resultado se multiplica por el volumen de orina y por la dilución si fue necesaria. Expresión de los resultados en mmol/24h.
FASE POSANLITICA
INFORME DE LOS RESLUTADOS
Las concentraciones para orina de 24h se expresan en: mmol/24h, en orinas espontáneas se expresan en mmol/l.
l
VALORES DE REFERENCIA:
Para orinas de 24h:
Na: 75 a 200 mmol/24h.
k: 40 a 80 mmol/24h.
1. Hamburger,J. Crosnier, J. Nefrologia pág. 103 –105 Editorial. Edición Revolucionaria. 1982 Cuba.
2. Davinsohn I. Y Henry J.B, Diagnostico Clínico por el Laboratorio (1982).
- 3. Gradwoll. Método y Diagnóstico del Laboratorio Clínico. Capitulo 22 Pág. 435. Editorial Científico Técnica 1983. CUBA.
4. Bauer. Análisis Clínico. Método e Investigación. Nefrología Pág. 19-110. Editorial Reverte 1986.
5. Widman, f. L. Interpretación Clínica de las pruebas de laboratorio Capitulo 17 Pág. 522 Editorial. Edición Revolucionaria 1986. Cuba.
6. Colina J.A y coautores. Laboratorio clínico. T-I. Editorial pueblo y educación, 1989. Bawer. Análisis clínicos. Métodos e interpretación (1984).
7. Colina J.A y coautores. Laboratorio clínico. T-I. Editorial Pueblo y Educación 1989.
8. Colectivo de autores. Selección de temas para técnicos básicos de laboratorio clínico. Editorial Ciencias médicas. 2002.
9. Jorge Suardíaz, Celso Cruz, Ariel Colina. Laboratorio Clínico. Editorial Ciencias médicas. 2004.
Agradecimientos: Agradecemos la colaboración en especial del Dr. Especialista en primer grado de Laboratorio Clínico José Ramón Pacheco Albelu y a todos los profesionales que de una forma u otra han dado su aporte a la realización de este folleto.
Autor:
Lic. Bioquímica Ana Luisa Piñón Pérez
Lic. Bioquímica Elisa Luis Ramírez
Lab. Clinico. Hospital Faustino Perez Hernandez
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