Propiedades hemaglutinantes de cepas de Escherichia coli aisladas de corderos diarreicos y su relación con su toxicidad

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RESUMEN: Se examinó el contenido intestinal de 107 corderos neonatos muertos con el objeto de aislar cepas de E. coli productoras de toxina termoestable (ST) y verotoxina (VT) y también comprobar su capacidad hemaglutinante.

Se aislaron 84 (78.5%) cepas de E. coli, 70 (83.3%) de ellas fueron hemaglutinantes de eritrocitos de diversas especies de animales, preferentemente de gallina, la mayoría de las cuales resultaron ser manosa resistentes (HAMR). A su vez, se logró el aislamiento de 18 cepas elaboradoras de ST y de 11 de VT, todas ellas con capacidad hemaglutinante, predominando las de tipo HAMR.

Se recomienda hacer la prueba de hemaglutinación y posteriormente pesquisar la estructura antigénica y capacidad enterotóxicas de las cepas aisladas, particularmente cuando se analiza un gran número de cepas, con la finalidad de disminuir los costos de diagnóstico, logrando una información preliminar de cepas presumiblemente patógenas.

Palabras claves:  E. coli,  hemaglutinación,  diarrea,  cordero.

SUMMARY: Hemagglutinating properties of Escherichia coli strains isolated from diarrheic lambs.

The intestinal content of 107 neonatal dead lambs was examined in order to isolate producers of thermostable toxin (ST) and verotoxin (VT) E. coli strains. Besides, the hemagglutinating properties were also tested.

Eighty four (78.5%) strains of E. coli were isolated, 70 (83.3%) of which were hemagglutinating to red blood cells of different animal species, mainly hen; most of them proved mannose resistent (MRHA). Also, 18 strains ST producers and 11 VT producers were isolated, all of them with agglutinating activity; the MRHA type predominating.

It is recommended to run the hemagglutination test and secondly to study the antigenic structure and enterotoxic capacity of the isolated strain, particulary when a big number of strains is analized, in order to decrease the diagnostic costs and to obtain preliminary information on presumably, pathogenous strains.  

Key words:  E. coli,  hemagglutination,  diarrhea,  lambs.

INTRODUCCIÓN

La infección intestinal por E. coli, tanto en el hombre como en los animales domésticos, es provocada por cepas que se adhieren y colonizan las células superficiales epiteliales del intestino delgado (Evans y col., 1978, 1979), lo que logran por diferentes adhesinas, entre las que destacan las fimbrias en las cepas enterotóxicas (ETEC) (Evans y col., 1978, 1980b). Así, se describen diferentes fimbrias que se encuentran presentes en cepas de origen animal como K88 (F4) preferentemente en infecciones del cerdo y las K99 (F5) en terneros y ovinos (Burrows y col., 1976; Jones y Rutter, 1974; Arp, 1988). También se describen cepas que exhiben fimbrias que tendrían una función discutible como adhesinas de la mucosa del intestino delgado, como acontece con los pilus tipo I (F1), las que pueden diferenciarse de otras por ser hemaglutinantes manosa sensibles (HAMS); en cambio las cepas enterotóxicas presentan fimbrias que son manosa resistentes (HAMR) (Evans y col., 1978; Arp, 1988).

En atención a que las propiedades hemaglutinantes pueden corresponder a importantes factores de virulencia, el objetivo del presente artículo es dar a conocer la capacidad de hemaglutinación de cepas de E. coli aisladas de corderos neonatos diarreicos, relacionándolas con la capacidad enterotóxica que exhiben.

MATERIAL Y MÉTODOS

Se obtuvieron muestras del contenido intestinal de 107 corderos muertos menores de 30 días de edad que presentaban diarrea. Las muestras se sembraron en placas de agar eosina azul de metileno con el objeto de aislar cepas de E. coli. De aquellas siembras en que se desarrollaron colonias características de ser E. coli en más del 80% de la placa Petri (Schudel, 1985), se replicaron en agar peptona para purificarlas, identificándolas posteriormente por sus propiedades bioquímicas y fisiológicas.

A las cepas que resultaron ser E. coli se les estudió su capacidad de producir toxina termostable (ST), verotoxina (VT) y sus propiedades hemaglutinantes. Para la producción de ST se procedió como se describió anteriormente (Zamora y col., 1994), con la salvedad de que para la detección de la toxina en los filtrados obtenidos se empleó la técnica de ELISA de competencia, usando kit elaborado por el laboratorio Oxoid, Inglaterra. Para la pesquisa de VT se siguió la misma técnica de inoculación de los filtrados en monocapa de cultivo celular Vero utilizada en 1994 (Zamora y col., 1994). 

Para determinar las propiedades hemaglutinantes, las cepas se cultivaron a 37°C por 18 – 24 h en medio agar CFA (Evans y col., 1979, 1980a) consistente en agar 2%, casamina ácida 1%, extracto de levadura 0.15%, MgSO4 0.005% y MnCl2 0.0005% a pH 7.4 con la finalidad de incrementar el desarrollo de fimbrias. Los cultivos se suspendieron en PBS pH 7.2 a una concentración de aproximadamente 109/ml mezclando sobre una placa 20 µl de la suspensión bacteriana con una gota (20 µl) de suspensión de eritrocitos al 3% previamente lavados por tres veces en PBS. La placa se agitó suavemente haciéndola rotar a temperatura ambiente, leyéndola dentro de un minuto. Para examinar la especificidad de las hemaglutininas, cada cepa se probó por separado frente a eritrocitos de gallina, bovino y cobayo. Para detectar la sensibilidad de la hemaglutinina a la manosa, se repitió la prueba con las cepas hemaglutinantes suspendiendo, tanto las cepas como los eritrocitos, en D-manosa al 1% en PBS pH 7.2 (Cox y Houvenaghel, 1987; Evans y col., 1978, 1979).