Determinación de los valores puntuales del hemograma en la iguana verde (página 2)

2. Realmente no hay reglas estrictas referentes al alojamiento de las iguanas, pero hay algunos cosos que hay que tener en cuenta. La jaula en la que se mantiene suele llamarse terrario. Este tiene que ser de tamaño suficiente y ha de estar provisto de los sistemas de apoyo a la vida necesaria ( calefacción, iluminación, control de humedad, ventilación entre otros).

   Las cubiertas para los accesorios más utilizada es la grava, se recomienda no usar arena porque sus granitos podrían introducirse en las escamas del reptil y causarle molestias. Toda la decoración es importante tenerla como rocas, troncos, plantas naturales o artificiales ya que estos implementos hacen sentir bien a la iguana porque se semejan a su hábitat natural.

   La calefacción es esencial, la iguana como otro reptil tiene sangre fría y deben ser mantenidos a una temperatura entre 28 y 35 °C, reduciéndola a unos 18 a 22 °C por la noche. (home.htmhome.htm 1993. 11 p) 1.

3. ALOJAMIENTO DE LAS IGUANAS

   Las iguanas son vegetarianas por lo que su dieta esta basada en verduras, plantas de casi todo tipo y frutos. De todas formas se debe tener cuidado con lo que se le suministre ya que aunque sean vegetarianas hay ciertas cosas que no deben comer. Entre las cosas que pueden comer están: alfalfa fresca, flores de rosa, peras, manzanas, uvas, ciruelas, zanahorias, tomate, calabaza, hojas de remolacha, amaranto, cilantro.

   Entre las cosas que no pueden comer están: repollo, coliflor, nabos, espinacas, apio, aguacate, perejil, remolacha. (1)

4. ALIMENTACIÓN

   En la naturaleza incluso en terrarios de gran tamaño, las iguanas macho son extremadamente territoriales, esto resulta muy evidente durante la época de apareamiento; en esta época los machos entablan combates rituales, se alzan sobre las cuatro patas y extienden de manera amenazadora sus papadas,. Una batalla normal en iguanas comienza cuando estos reptiles comienzan hacer circulo uno alrededor del otro golpeando sus cabezas hasta que uno de ellos se rinda y se aleje o aplaste su cuerpo contra el suelo en un acto de sumisión, el vencedor dejara escapar al vencido.

   Las iguanas hembras son mucho menos agresivas, incluso durante la época de apareamiento, ellas lucharan por un lugar para anidar si el espacio es escaso pero por lo demás se ignoran mutuamente. Durante la copulación el macho agarra el cuello o la cabeza de la hembra con sus dientes, sujetando la cola de la hembra con unas de sus patas traseras, la copulación puede durar de uno a veinte minutos.

   El periodo de gestación es de 49 a 90 días, las iguanas depositan los huevos en hendiduras del terreno arenoso, generalmente cerca de una masa de agua, la postura es alrededor de 30 huevos en aproximadamente cinco horas. (ACKERMAN, 1994. 10 P)

5. REPRODUCCIÓN DE LAS IGUANAS
6. DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA

La iguana verde Iguana iguana se puede encontrar desde el sur de México hasta el Brasil y en algunas islas del Caribe, cercanas al continente.

En las áreas donde solo hay bosques, se adaptan a lugares desde el nivel del mar hasta los mil metros sobre el nivel del mar. Además se han introducido con éxito en Miami y Florida (Estados Unidos de América). ( WALLACH, 1983. 1158p)

7. 1. Serie roja
8. ELEMENTOS CELULARES SANGUÍNEOS

Los hematíes son esferositados y al pasar a través del haz del láser se calcula el número y el tamaño. Todos los anfibios y reptiles poseen eritrocitos nucleados, leucocitos y trombocitos, los recuentos de células blancas se obtienen con el hemocitometro y con procedimientos de conteo estándar, los eritrocitos son biconvexos ovalados algunos pueden encontrarse sin núcleo, los linfocitos varían y su citoplasma es granulado, el monocito contiene un núcleo sencillo y no dentado y es más grande que los linfocitos su citoplasma es granular, el neutrofilo se caracteriza por su núcleo no segmentado, el eosinofilo esta identificado como cuencas esféricas y granuladas, el trombocito es una célula elíptica que es más pequeña que el eritrocito. La variación en el índice de refracción mide la cantidad de hemoglobina, la cual se determina por un canal independiente. De esta forma obtenemos: (DIVERS, 1996. 12 p) 2.

4.7.2 HEM: recuento de hematíes. Su aumento puede indicar deshidratación, y la disminución anemia.

3. HB: cantidad de hemoglobina total.

4.7.4 HCT: hematocrito, o relación entre el volumen de los hematíe de sangre total. El aumento y la disminución en estos dos parámetros tiene el mismo significado que en el número de hematíes.

4.7.5 VCM: valor medio del volumen de cada hematíe. Este índice permite establecer el tipo de anemia en base al tamaño, pudiéndose clasificar en microcíticas, normocíticas y macrocíticas.

4.7.6 HCM: hemoglobina corpuscular media, o el valor medio de hemoglobina en cada hematíe. La disminución de este índice supone un trastorno en la síntesis de hemoglobina, y el aumento aparece en algunos casos de macrocitosis. CHCM: concentración corpuscular media de hemoglobina, o la cantidad de hemoglobina contenida en 100 ml de hematíes.

El aumento o disminución significa lo mismo que en el caso de HCM. Con la HCM y CHCM se clasifican las anemias en hipocrómicas, normocrómicas, e hipercrómicas. (2)

4.7.7 RDW: coeficiente de variación del tamaño de los hematíes. Indica si la población de hematíes es homogénea o no. Estas desviaciones además se indican por medio de alarmas con cruces, pudiendo ser:

+ débil

++ moderada

+++ marcada.

4.7.8 HDW: desviación estándar de la disminución de las concentraciones de hemoglobina, para cada hematíe individual. Tiene un significado similar al RDW, pudiéndose evidenciar hipo o hipercromicas. También existe para la HDW el sistema de alarmas con cruces. Con todos estos parámetros se pueden clasificar las anemias como micro, normo o macrocíticas; hipo, normo o hipercrómicas. En este caso, el instrumento además determina numéricamente el porcentaje de células microcíticas, macrocíticas, hipocrómicas e hipercrómicas. Puede suceder que aparezcan dos curvas en el volumen de hematíes, dos curvas en la concentración de hemoglobina. En este caso no sabremos que población de hematíes es hipo o normocrómica. Para solucionar este problema el autoanalizador proporciona un grafico con nueve cuadrantes, donde se enfrentan tamaño de hematíes (eje Y) y concentración de hemoglobina (eje X). (ISIS. Physiological data references values 1995. 46 p)

4.7.9 Leucocitos

Estos se cuentan lisando previamente los hematíes. La formula leucocitaria se determina por medio de dos tinciones: azul alcian, donde se cuentan los basófilos, mononucleados y polinucleados en un canal aparte, y peroxidasa para el resto. (BARTEN, 1993. 5p) 3. (Wintrobe, 1.961. pag 1.700)

4.7.9.1 LUC: (large unstained cells) aquí se determinan linfocitos grandes hiperactivos, linfoblastos, mieloblastos, y en general todas las células patológicas. Un aumento de LUC se traduce en forma de alarmas como ATIP +, o IG + (granulositos inmaduros). Las leucemias linfoblásticas tienen un número levado de LUC. (3)

4.7.9.2 IL: índice de loburalidad. Si este índice es alto la población predominante es polilobulada, indicando una patología de la serie granulocítica. Si por el contrario el IL es bajo predominara la población monolobulada, indicando una patología linfoide o mieloblastica. (3)

4.7.1.1 Serie blanca

4.7.1.1.1 MPXI: índice de actividad peroxidasica media de la población de neutrofilos. Si este factor es bajo se trata de una patología de la serie mieloide. Si por el contrario es alto indica la presencia de cayados. La presencia de lípidos produce una alteración en el diagrama de peroxidasa y en el de basofilos, así como un error en la formula leucocitaria. Las plaquetas se cuentan en el canal de hematíes, variando el instrumento el umbral de sensibilidad. Además del número total de plaquetas aparecen índices plaquetarios. (MUSSMAN, 1978. 3 p)

4.7.1.1.2 VPM: corresponde al volumen plaquetar medio (similar al VPM en hematíes).

4.7.1.1.3 PTC: plaquetocrito, o volumen que ocupan las plaquetas en el volumen de sangre total (similar al hematocrito en hematíes).

4.7.1.1.4 PDW: ancho de distribución del volumen de las plaquetas. Una disminución en el número y en el volumen de plaquetas, suele corresponder a un proceso inmunomediado (ehrlichiosis, enfermedades auto inmunes, etc.).

El autoanalizador también indica si existe agregación de plaquetas, por medio de una línea de 45 grados con respecto a la grafica de leucocitos. Este fenómeno es frecuente en muestras donde la cantidad de sangre añadida al tubo con EDTA es mínima. Por el contrario, un aumento en el número de plaquetas puede indicar patologías medulares, y además un aumento de tamaño aparece en estas patologías, así como después de una hemorragia. (PARSON, 1970. 91 p)

4.8 Reportes de valores hematológicos en iguana Iguana iguana.

En estos reportes se presentan variaciones observándose sus valores en los Cuadros 1, 2 y 3. (Barten, 1993, 1) (ISIS, 1995, 1) (Divers, 1996, 1).

Cuadro 1 . Valores hematológicos en la iguana verde (Iguana iguana).

Cuadro 2. Cuadro hemático en iguana verde Iguana iguana.

Fuente: ISIS. Physiological data references values.

Cuadro 3. Valores hemáticos normales en iguana verde Iguana iguana.

Fuente: Divers. Normal haematology & plasma biochemestry values in the green iguana (Iguana iguana).

5. DISEÑO METODOLÓGICO

5.1 UBICACIÓN GEOGRÁFICA

El proyecto se llevará a cabo en la zona urbana del municipio de Barrancabermeja, Santander; ubicado en el valle del río Magdalena. Su posición geográfica es: latitud norte: 7º03’50’’, latitud oeste: 73º51’50’’.

Barrancabermeja se caracteriza por poseer una temperatura promedio de 28º C, humedad relativa del 80%, precipitaciones anuales de 2820 mm y una altura de 75 m.s.n.m.

El perímetro urbano limita así:

NORTE: Parte del cruce de la orilla del río Magdalena con el ferrocarril Galán, situado al norte de la refinería de ECOPETROL, bordeando las chucuas que limitan los barrios Veinte de Enero, Santa Isabel Eduardo Rolón; sigue por ésta en dirección oriental a encontrar la ciénaga del Rosario, bordeándola por el lado sur hasta encontrar el puente de la ciénaga San Silvestre, el Tigre, ciénaga Brava hasta el punto denominado Puerto Ciénaga Brava.

ORIENTE: Parte del puerto Ciénaga Brava, con rumbo sur-oeste hasta encontrar el punto donde forma un ángulo la tubería del oleoducto de Ecopetrol, en una distancia aproximada a 3600 m, siguiendo hacia el occidente a encontrar el aislamiento de 30 m de las líneas de alta tensión; desde este punto continua hacia el sur, paralelo a la línea en mención hasta encontrar la Autopista a Bucaramanga; con rumbo sur-oeste hasta la carretera al Centro que dista 500 m de la intersección vía al Retén hasta el punto localizado en la esquina nor-oriental de la ciénaga Juan Esteban.

SUR: Parte desde el punto anterior, siguiendo la orilla de la ciénaga Juan Estaban; continua hasta el occidente por la salida del caño del mismo nombre hasta el origen del brazo del caño Cardales.

OCCIDENTE: Parte del origen del caño Cardales. Sigue la margen del caño desemboca en el río Magdalena; continuando con esta margen hasta encontrar la prolongación del ferrocarril de Galán, creando así el perímetro urbano de la ciudad.

La zona urbana así delimita en un área de 35 km y está dividida en siete comunas conformada por barrios, o comunidades dotadas de una relativa independencia entre sí y que constituye por una singular estrategia socio-económica, esta división existente fue utilizada para el desarrollo estadístico de conglomerados. (Véase Cuadro 4).

Cuadro 4. Barrios por comunas en el municipio de Barrancabermeja.

Fuente: Planeación Municipal 2000

2. 1. Materiales
3. MATERIALES Y MÉTODOS.

5.2.1.1 Materiales de Campo

• 55 ejemplares de iguana verde Iguana iguana.
• Bata
• Guantes de cuero
• Vara con soga
• Bolsa de tela gruesa Mantasucia
• Tubos de vacutainer con EDTA

• Agujas para vacutainer calibre 21.

• Camisa para vacutainer.
• Algodón
• Alcohol
• Lápiz
• Cinta de enmascarar
• Cámara fotográfica
• Termo de refrigeración

2. Materiales de laboratorio.

• Colorante Wright de 1000 c.c..
• Colorante Giemsa de 500 c.c..
• Solución Marcano de 250 c.c..
• Reactivo de Drabkin de 500 c.c..
• Reactivo de Natt-Herrit de 250 c.c..
• Reactivo de Floxina de 500 c.c..
• Agua destilada.
• Caja de microtubulos con heparina.
• Caja de láminas portaobjetos.
• Caja de láminas cubreobjetos.
• Cámara de Neubauer.
• Centrífuga.
• Espectrofotómetro.
• Microscopio.
• Contador de células manual.
• Gradilla.
• Pipeta para conteo de glóbulos rojos.
• Pipeta para conteo de glóbulos blancos.
• Plastilina.
• Libreta de anotaciones.

1. 5.2.2.1 Tamaño de la muestra. Con base en los valores de la varianza poblacional según revisión de literatura, se estableció el tamaño de la muestra a partir del estadístico para poblaciones infinitas formulado por la ecuación:

   n = Z 2 * s 2 / e 2

   donde: n = Tamaño de la muestra.

   Z = Valor de la distribución normal para el 95% = 1.64.

   s 2 = Varianza muestral según revisión de literatura =

   Desviación para eritrocitos en iguana verde =

   0.45 (Johnson-Delaney, 1).

   e = Error de estimación = 10%.

   Por lo tanto:

   n = (1.64) 2 * (0.45) 2 / (0.1) 2

   n = 55 animales.

   2. Actividades de campo. La toma de muestras se realizará en las zonas donde halla vegetación, alrededor de rios, caños, ciénagas y parques naturales que se ubiquen dentro del perímetro urbano de Barrancabermeja.
2. Métodos.

Una vez cazados los animales (hipotéticamente sanos), se introducen en la bolsa de tela gruesa mantasucia, dejando al descubierto la cabeza y parte del tórax, sitio donde se canula la vena toráxica superficial mediante el sistema vacutainer, recibiendo las muestras de sangre en tubos de ensayo con EDTA o heparina respectivamente rotulados, manteniéndose estas muestras en refrigeración hasta ser llevadas al laboratorio de la Clínica Veterinaria de Unipaz para su procesamiento.

5.2.2.3 Actividades de laboratorio. Cada muestra previamente preservada en hielo, se llevará a procesamiento para obtener los valores correspondientes a recuento eritrocitario, recuento leucocitario, recuento diferencial leucocitario, hematocrito, hemoglobina e índices eritrociticos.

5.2.2.3.1 Recuento eritrocitario. Para la determinación del recuento eritrocitario se utilizará solución de Marcano en una proporción de 1990 lamdas, a la cual se le adiciona 10 lamdas de sangre anticoagulada (dilución 1:200) en un tubo de ensayo, el cual se agita durante tres minutos para luego con una micropipeta cargar el hematocitómetro o cámara de Neubauer.

Después de 45 segundos se hace el recuento en los cuatro cuadros de las esquinas y el cuadro central de la cámara para el conteo de los glóbulos rojos con el lente de 40 X en el microscopio.

El número obtenido en el conteo se multiplica por 10.000 para así obtener el número de eritrocitos por milímetro cúbico de sangre.

Para la preparación de la solución de Marcano se utilizan 5 g de sulfato de sodio y 1 ml de formol al 40%, los cuales se aforan en 100 ml de agua destilada.

2. Pasado el tiempo se agita el tubo con la dilución para homogenizar y se carga el hematocitómetro con una micropipeta.

   Después de 45 segundos se hace el recuento de leucocitos con el microscopio a 40 X en las cuatro cámaras para su conteo y el total se multiplica por un factor 250 para así obtener el número de leucocitos por mm3 de sangre.

   El reactivo Natt-Herrick requiere de 500 ml de agua destilada, 3.88 g de NaCl, 2.5 g de Na2SO4, 2.91 g de Na2HPO4*12H2O, 0.25 g de KH2PO4, 7.5 ml de formaldehído al 37% y 0.1 g de violeta de metilo 2b.

   El reactivo de Floxina requiere de 50 mg de floxina, 5 ml de formol al 3% y 95 ml de Ringer (no lactato). (Hernández, 1993, 55).

3. Recuento leucocitario. Para el recuento total de glóbulos blancos, se utilizará reactivo Natt – Herrick o el reactivo de Floxina en una proporción de 990 lamdas, a la cual se le adiciona 10 lamdas de sangre anticoagulada (dilución 1:100) en un tubo de ensayo que es bien agitado durante tres minutos y dejado en reposo dos horas para que la solución actúe destruyendo los eritrocitos.

   Se deja secar a temperatura ambiente, protegiéndolo contra la humedad y el polvo, para luego proceder a colorearse por el método de Wright y Giemsa.

   El procedimiento que se sigue para la coloración de los frotis es:

   Para Wright se cubre el frotis con el colorante durante tres minutos, tiempo al cual se le añade agua destilada durante tres minutos, se procede a lavar con agua corriente y se deja secar la lámina verticalmente a temperatura ambiente.

   Para Giemsa el frotis se cubre con el colorante y con agua destilada durante 30 minutos, para luego lavarlo con agua corriente y dejarlo secar verticalmente a temperatura ambiente.

   El conteo diferencial de los leucocitos se realiza en el microscopio de luz con objetivo de inmersión (100X) observando la morfología celular, teniendo en cuenta que la lámina debe recorrerse en todas las direcciones ordenadamente, tratando de hacer un barrido total de la lámina.

4. Recuento diferencial leucocitario. Para el extendido de sangre se coloca una pequeña gota de sangre en el extremo derecho, en la parte central de un portaobjeto, dejando que por capilaridad se extienda a lo largo del borde y se hace deslizar hacia el otro extremo para lograr una película delgada de sangre.
5. Hematocrito. El volumen de glóbulos rojos empacados se obtienen con la técnica de microhematocrito, llenando con sangre un tubo capilar y centrifugándolo de 10.000 a 13.000 revoluciones por minuto, durante cinco minutos en la centrífuga especial para microhematocrito; luego se retira el capilar y se realiza la lectura en la tabla para microhematocrito y se determina el porcentaje de glóbulos rojos.

   Con una pipeta automática se toma 0.1 ml de la muestra, limpiando el exceso de sangre de la punta de la pipeta. Después se deposita en un tubo de ensayo añadiéndole 2.5 ml del reactivo Drabkin y se procede a tapar el tubo, el cual se invierte dos o tres veces.

   Es necesario dejar reposar la muestra de sangre y el reactivo durante diez minutos para obtener la máxima conversión de hemoglobina a cianometahemoglobina.

   El espectrofotómetro se calibra con agua destilada siempre que se utilice una muestra diferente; luego de esto se introduce el tubo con la muestra en el espectrofotómetro y se realiza la lectura de la absorbencia contra blanco de agua destilada, pasados dos a tres minutos, en el tablero digital. Se trabaja con una longitud de onda de 540 nm.

6. Hemoglobina. Para el análisis de la hemoglobina se utilizará el método de la cianometahemoglobina.
7. Índices hematológicos. Se determinará por las formulas de Wintrobe.

• Volumen corpuscular medio (VCM). Es el volumen promedio de los glóbulos rojos en un muestra determinada de sangre, obtenido a partir de la relación:

VCM = ___Hematocrito x 100___ = µ3

# total de eritrocitos

• Hemoglobina corpuscular media (HCM). Es el promedio de hemoglobina que tiene los eritrocitos en una muestra de sangre, calculado a partir de la relación:

HCM = ____Hemoglobina x 10___ = µ.µ g

# total de eritrocitos

• Concentración de hemoglobina corpuscular media (CHCM). Es la proporción de hemoglobina, peso y volumen que hay en el promedio de células rojas en una muestra de sangre, determinada a partir de la relación:

CHCM = Hemoglobina___ = %

Hematocrito

5.2.2.4 Tratamiento de la información. Los datos obtenidos después de ser tabulados y codificados permitirán su procesamiento a través de estadística descriptiva gráfica y estadística descriptiva numérica mediante la obtención de los valores correspondientes a medidas de tendencia central (media) y medidas de variabilidad (varianza, desviación estándar, rango, recorrido interquartil) , para lo cual se utilizará el software MATLAB.

6 PRESUPUESTO

7 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

Cuadro 2. Distribución de las actividades en el tiempo

LISTA DE ACTIVIDADES. TIEMPO DE INICIO Y TERMINACIÓN DE ACTIVIDADES (METODO PERT-CPM)

Tiempo total de duración del proyecto: 28 semana

BIBLIOGRAFÍA

Veterinary Clinics of North America: Small animal practice. Volume 23-number 6, November 1993. 8p

ACKERMAN, Lowell. The biology, husbandry and health of reptiles. In: Biology of reptiles. T.F.H. Publications, 1994. Disponible de Internet:Cyclura%20-%20taxonomy.htm. 10 p.

BARTEN, Stephen L. The medical care of iguanas and other common pet lizards. In: Veterinary clinics of North American: small animals practice. Vol. 23, No 6 (1993). Disponible de Internet: Diagnosticoveterinario_com.htm. 5 p.

DIVERS, S. Normal haematology & plasma biochemestry values in the green iguana (Iguana iguana). British Veterinary Zoological Society, 1996. Disponible de internet: Extranet.htm. 12 p.

ISIS. Physiological data references values. (Citado en Julio de 1995). Disponible de internet: Iguana%20blood%20examination.htm.

LA IGUANA. s.p.i. 46 p.

MUSSMAN, Harry C. y RAVE, Gustavo. Patología Clínica Veterinaria. Santa Fe de Bogotá: I.C.A., 1978. v. 3, p. 2-3.

PARSONS, Gans. Biology of the Reptilia. London: Morfhology Academic, 1970. v. 3, p. 73-91.

WALLACH, Joel D. and BOEVER, William J. Diseases of exotic animals. U.S.A.: W:B. Sanders, 1983. 1158 p.

Home.htmhome.htm Alimentación y comportamiento de las iguanas. 1993. P 3.

Wintrobe, MM. Clinical Hematology, 5th ed. Lea and Febiger, 1961 pg. 1700)

Adriana Cristina Ulloa Riaño

2003