Determinación de la capacidad biodegradadora de hidrocarburos aromáticos policiclicos de los hongos (página 3)

Tabla N° 10. Diámetros de las cepas en medio Czapek Dox Agar

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

En el estudio macroscópico se midió el crecimiento, la cual fue determinada midiendo el diámetro de las cepas de hongos aisladas, en las placas de Petri durante 15 días de manera que el crecimiento llegara a llenar la placa de Petri cuyo contenido era medio de cultivo Czapek Dox y cuyo diámetro es de 90 mm. Las mediciones se realizaron en intervalos de 24 horas. Al obtener la tabla número 10 con los valores de velocidad de crecimiento de las cepas a lo largo del tiempo, se estableció que la cantidad de datos obtenidos era muy numerosa, por lo que se debió aplicar un análisis estadístico usando la T de Student, estableciendo un límite de confianza de un 95 % y de esta manera obtener promedios aceptables.

Tabla Nº11. Limites de confianza del 95%, media y desviación estándar

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

En la tabla número 11, se puede observar que los hongos con mayor crecimiento fueron: 3Pc – correspondiente al género Aspergillus níger con una media de 7,63 , el 1Aº correspondiente al género Rhizopus ssp con una media de 6,03, MBI- correspondiente al Aspergillus flavus con una media de 6,31, pero como este hongo se encuentra fuera de la zona en estudio no se tomo en cuenta para la selección, y por este se tomo la cepa 2AII correspondientes a el género Aspergillus flavus con una media de 5, 75.

Figura #08. Diámetros de las cepas en medio Czapek Dox Agar

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Al analizar la figura #8 obtenida de los diámetros de crecimiento en función del tiempo se observó que las cepas óptimas en cuanto a su crecimiento en el medio de cultivo antes mencionado fueron las cepas 1Pc, 3Pc-, 4PcII°, 4PcII-,1A°,2PcI^, 4A*, MBI-,3PcI°,2PcI*,4A°,2AI-,3pcº,2A, 2PcIº,4A-,2AII, las cuales el ultimo día de medición ya habían alcanzado su crecimiento en toda el área de la capsula es decir los 9cm de diámetro, lo que las hace las cepas con mayor capacidad metabolizadora. Ver anexos desde el 16 hasta el 24 ubicacados en la desde la pagina 87 hasta la página 91

Determinación de la Capacidad Biodegradadora de las Especies Fúngicas

Para la realización de este estudio se seleccionaron 3 cepas (3Pc- Hongo Negro,1A° Hongo Blanco, 2AII Hongo Verde) de características diferente y con buena capacidad de degradación de las 27 encontradas.

Tabla N°12. Lectura del espectrofotómetro para los 5 y 10 días

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Tabla N° 13. Lectura del espectrofotómetro de los 15 y 20 días

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Tabla Nº 14. Porcentaje de disminución de ppm de antraceno (120 y 200) según los días

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Tabla Nº15. Porcentaje de disminución de ppm de antraceno(300 y 450) según los días

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Figura #09 Capacidad Biodegradadora de los Hongos según los días (120 y 200 ppm de Antraceno)

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Figura #10. Capacidad Biodegradadora de los Hongos según los días (300 y 450 ppm de Antraceno)

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Con los resultados obtenidos en la lectura del espectroni correspondientes a la tabla 12 y 13, se puede apreciar mediante las figuras 9 y 10 la capacidad de degradar antraceno de los hongos, donde en el figura 8, se puede observar que el hongo Aspergillus níger fue el que degrado mayor cantidad de antraceno. A diferencia del figura 9 donde el mismo obtuvo una metabolización regular, siendo el Rhizopus ssp el que demostró mayor velocidad de descomposición de antraceno.

Tabla Nº16. Pesos de los Hongos en gramos (g) con respecto al tiempo

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Figura #11. Crecimiento del hongo (Aspergillus flavus) según su peso y fuente de carbono Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Figura #12 Crecimiento del hongo (Aspergillus níger) según su peso y fuente de carbono. Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Figura #13. Crecimiento del hongo (Rhizopus ssp) según su peso y fuente de carbono. Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

En las figuras 11,12 y 13 se pueden observar el aumento de peso considerable en aquellos hongos que tenían como fuente de carbono sacarosa, los de más hongos que tenían como fuente de carbono antraceno a diferentes concentraciones, se concluyó que el aumento fue mínimo utilizando este hidrocarburo como fuente de carbono, esto se debe a que el antraceno tiene mayor impedimento estérico que la sacarosa, haciéndolo más difícil de degradar.

Determinación de la capacidad biodegradadora del consorcio fúngico mediante un simulacro (11 semanas)

Tabla Nº17. Lectura del Espectrofotómetro a las 11 semanas

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

Según los resultados obtenidos se pudo apreciar que el simulacro con mayor cantidad de antraceno (381,432 ppm) tuvo una disminución del 40,61% en comparación con el ensayo que tuvo menor cantidad de antraceno (221,027 ppm) el cual obtuvo un 4,9 %.

Tabla Nº 18. Peso del Consorcio a las 11 Semanas

Fuente: Cáceres J. Lara H. (2011)

En la tabla Nº 15, se presenta el aumento de la masa fúngica en el ensayo con mayor cantidad de antraceno con respecto a la menor, esto se debe a que puede que el consorcio tenga un límite de consumo con respecto a la cantidad de ppm.

Conclusiones

De las 27 cepas aisladas 14 fueron Aspergillus níger , 9 Rhizopus ssp y 5 Aspergillus flavus, predominando el hongo Aspergillus níger en un 51,85%

Los hongos que tuvieron como fuente de carbono sacarosa obtuvieron un mayor peso y crecimiento que los hongos que se alimentaban con antraceno debido a que este tiene más impedimento estérico.

Las cepas más sobresalientes fueron: 1A° Rhizopus ssp para las concentraciones más altas de antraceno (300ppm), y 3Pc- Aspergillus níger para las concentraciones más bajas de antraceno(150ppm) demostrando que estos tienen una mayor capacidad biodegradadora con respecto a los demás.

El consorcio de hongos tuvo un mejor desempeño en el ensayo con mayor concentración de antraceno (400ppm) disminuyendo un 40,61% del contaminante.

Los resultados demostraron que dichas cepas lograron una disminución de antraceno desde el 5% hasta un 50%, donde el hongo Rhizopus ssp tuvo mayor desempeño a altas concentraciones (400 ppm) y el hongo Aspergillus níger tuvo un mejor desempeño a concentraciones menores (200 ppm), proponiendo así que dichas cepas sean almacenada, para que sean usadas en el futuro en un caso de contaminación de agua por hidrocarburos en la costa oeste de la Península de Paraguaná.

Recomendaciones

Ampliar el tiempo de los ensayos correspondientes a la biorremediación de hidrocarburos de manera de obtener resultados más favorables.

Modificar la metodología para la biorremediación de hidrocarburos en 20 días, es decir colectar muestras de agua en envases de 1 litro por cada hongo en vez de 4 botellas por cada hongo, donde se esterilice el medio Czapek sin fuente de carbono y después se agregue el antraceno con hexano y así obtener una mezcla homogénea para posteriormente inocular las esporas de los hongos.

Al pasar los primeros 5 días extraer de esa mezcla homogénea 20 ml del medio y realizar la extracción liquido – liquido y medir la cantidad de ppm en el espectrofotómetro, esto debe realizarse sucesivamente para 10,15 y 20 días. De esta manera se podrá detallar los resultados obtenidos de la capacidad biodegradadora del hongo con respecto al tiempo.

Para obtener resultados más favorables se recomienda que el tiempo de biodegradación sea más amplio y que allá un seguimiento más especifico para saber con exactitud hasta que cantidad de contaminante son capaces de biodegradar los hongos.

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Apéndice

• Calculo de los parámetros fisicoquímicos en las muestras de agua de mar

• Calculo de la concentración de células de los microorganismos por mililitro de solución

Anexos

AREA DE LA INVESTIGACION

Anexo#01 Península de Paraguaná

Anexo#02 Punta Cardón

Anexo #03 Amuay

Anexo# 04 Amuaycito

Anexo #05 El Pico

Anexo #06 Amuay

Anexo #07 Amuay

Anexo #08 Amuay

Anexo #09 Amuaycito

Anexo #10 El Pico

INSTRUMENTOS Y EQUIPOS

Anexo #11 Campana de flujo laminar, LIADSA

Anexo #12 Balanza, Liadsa

Estufa, Liadsa

Anexo #13 Autoclave, Liadsa

Anexo #14 Cámara de Neubauer

Anexo #15 Vista microscópica de la cámara de Neubauer

TRABAJO DE LABORATORIO

Anexo #16 Aspergillus níger del 3cer punto de muestreo de Punta Cardón

Anexo #17 Aspergillus níger del 4to punto de muestreo de Punta Cardón

Anexo #18 Aspergillus níger del 2do punto de muestreo de Punta Cardón

Anexo #19 Aspergillus níger del 4to punto de muestreo de Punta Cardón

Anexo #20 Aspergillus níger del 1er punto de muestreo de Punta Cardón

Anexo #21 Aspergillus níger del 2do punto de muestreo en Amuay

Anexo #22 Aspergillus níger del 2do punto de muestreo en Amuay

Anexo #23 Aspergillus flavus de la muestra blanco tomada en el Pico

Anexo #24 Vista microscópica del Aspergillus

Anexo#25Degradacion de los hongos con Czapeck y antraceno

Anexo#26Degradacion de los hongos con Czapeck y antraceno

Anexo#27 Extracción liquido – liquido del antraceno

Anexo#28 Extracción liquido – liquido del antraceno

DEDICATORIA

A dios por ser un refugio en medio de las adversidades y ayudarme a vencer todos los obstáculos que se me presentaron

A mi hijo Santiago José Núñez Cáceres por ser mi motor para seguir con pie firme hasta el final

A mis padres Estefanía Zambrano y Laureano Cáceres por ser el soporte durante toda mi vida y mi carrera.

A mi hermana Yenny Guerrero por siempre tener una voz de aliento con quien conversar y por apoyarme cuando más necesitaba.

A mi esposo Miguel Amílcar Núñez por ser un buen compañero y amigo y por la ayuda brindada cada día

A mis amigos con los que compartir los buenos y malos momentos, los que estuvieron allí para apoyarme y todos lo que de una manera u otra me ayudaron a resolver algunas de tantas dificultades que se presentaron

A mi compañera Haylin Lara, por dar lo mejor de su parte para que juntas cumpliéramos nuestra tan anhelada meta

Jessica Z. Cáceres Z

DEDICATORIA

A, Dios todo poderoso, por permitir que día a día despertemos con buenas aspiraciones y entusiasmo de seguir adelante.

A, mi mama Suleyma Ramírez por ser un patrón y pieza fundamental, cabeza de hogar, madre y padre de 4 hijos que llevas siempre por buen camino con mucha constancia y dedicación.

A, mis abuelos Carmen y Francisco por estar presente en cada momento de mi vida y siempre apoyándome para seguir adelante, este es un ejemplo de los que sigo a diario decretado por ustedes.

A, mis hermanos Homero, Jesús y Susana los Amo soy un ejemplo para ustedes espero que me sigan adelante y por ustedes e completado unas de mis metas.

A, mis tíos Oneida, Linda, Francisco por su apoyo y en especial a mi tío Carlos Ramírez que a pesar que no te encuentras físicamente sé que me ayudas y permites que todo me salga bien Te Amo Cachy.

A, la Familia Teixeira y a la Familia Baptista por brindarme el calor de hogar y sentirme como en casa, por ser quienes estuvieron conmigo en las malas y buenas, apoyándome incondicionalmente los quiero, A mi novio Eduardo Teixeira por ser una de las personas que me motivo para que continuara hasta el final de esta meta.

A, mis amigos y compañeros de la universidad Yanerys Caraballo, Darwing Castillo, Ana Goncalves, José David Goncalves, Elys Rodríguez, Rafael Torrealba, Orlando Prado, Reinaldo González, Gabriel Roberti, Adriana Barreto, Junior Montilla, Gabriel Maldonado, Adriana Guanipa, Domnier, Lalo, Cesar Quero, Paul Flores, Carla Zarraga, Giovanni Giamboi, Mary Carmen Chirinos, Lendis Bustos, Nelvis García, Arelis Betancourt, Ángel Semeco, Yelwis Quiñones, Zaher, Yusef, Ramón Belandria, Miguel Núñez, quienes compartieron momentos de angustias, alegrías, y me ayudaron siempre a solventar las pequeñas y grandes dificultades que se hicieron presentes.

A, mi compañera Jessica Cáceres, por dar lo mejor de sí en todo momento y por el apoyo mutuo en equipo.

A, mi tutor Francisco Yegres y a los profesores: Héctor Morán, José Rodolfo, José Araujo, por guiarme y aconsejarme a lo largo de la realización y desarrollo de esta investigación.

Haylin C. Lara R.

AGRADECIMIENTO

A dios por darme la sabiduría suficiente para salir adelante con mi carrera y con este trabajo de grado.

A mis padres Estefanía Zambrano y Laureano Cáceres por brindarme su apoyo en todo momento hasta el final

A mi hermana Yenny Guerrero por estar pendiente de mí y colaborar conmigo en todo lo que pudo

A mi esposo por toda la colaboración que me brindo y que me sigue brindando y a mi hijo Santiaguito por ser mi más grande motivación.

A mi tutor Francisco Yegres por compartir sus conocimientos para lograr la elaboración de este trabajo de grado al igual que otros profesores como: Héctor Morán, Rodolfo Colina, Edgar Loaiza, José Araujo, a los técnicos de los laboratorios y a todas aquellas personas que de una u otra forma aportaron su granito de arena para lograr esta meta gracias por su ayuda y consejos para que esto fuera posible.

A mi compañera Haylin Lara por trabajar conmigo de la mano como un buen equipo sin flaquear hasta el final

A la Universidad Nacional Francisco de Miranda por abrirme sus puertas y darme la oportunidad de crecer como profesional y lograr lo que ahora tengo gracias…

Jessica Z. Cáceres Z

AGRADECIMIENTO

A, Dios por haberme dado la misión de vida, por guiarme y protegerme cada paso que di durante estos años, Gracias mi Dios he culminado con éxito este logro tan deseado.

A, mis padres por darme la vida y muy en especial a mi madre por ayudarme hasta el cansancio y por brindarme la confianza y el apoyo que necesite a lo largo de esta carrera.

A, mis hermanos, Abuelos, Tíos y Primitos porque siempre estuvieron pendiente de mi de verdad gracias por su colaboración.

A, mis primitos Juan Francisco, Patricia y a mi sobrinito Eduardo, por llenarme de alegrías por horas, por esperar siempre mi anhelada llegada a mi hogar los quiero mucho.

A, la Familia Teixeira y Familia Baptista por que fueron y serán mi familia de Punto Fijo, les agradezco a cada uno de ellos: José Teixeira, Vera de Teixeira, Verónica Teixeira, Sra. Laurinda, Anita Baptista, Dalila Baptista, Antonny, Anais, Diana, Daniela, por el apoyo y el cariño que recibí, que orgullo saber que mi novio pertenece a esta familia Eduardo Teixeira TE AMO gracias lindo por estar a mi lado y apoyarme en todo, gracias a ti cumplí lo prometido.

A, NOVEDADES VERACRUZ C.A., por permitirme laborar mientras estudiaba y porque en lugares de estas instalaciones pude pasar el tiempo estudiando y pude compartir también muchas emociones y a su vez me permitió crecer más como persona.

A, la Universidad Nacional Francisco de Miranda por brindarme la oportunidad de cursar estudios superiores.

A, mi tutor Francisco Yegres, a los Profesores: Edgar Loaiza, Héctor Morán, Rodolfo Colina, por que sin su ayuda y consejos nada de esto fuera posible, gracias por haber compartido sus conocimientos para el desarrollo de este trabajo de grado.

A, mi compañera Jessica Cáceres por compartir conmigo esta experiencia días enteros y todo el tiempo que fuera necesario y por su capacidad para poder emprender el gran trabajo en equipo.

A, todos mis compañeros y amigos mil gracias por sus preocupaciones y su interés a cambio de ayudarme en lo que fuera necesario.

Haylin C. Lara R.

Trabajo especial de Grado

Presentado ante la ilustre

Universidad Nacional Experimental

Francisco de Miranda

Para optar por el título de Ingeniero Químico

Autor:

Cáceres Zambrano, Jessica Zerimar.

Lara Ramírez, Haylin Carolina.

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL

FRANCISCO DE MIRANDA

AREA DE TECNOLOGIA

COMPLEJO ACADEMICO EL SABINO

PROGRAMA DE INGENIERIA QUIMICA

PUNTO FIJO, OCTUBRE 2011