Expresión de laminina en la microvasculatura de lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal (página 2)

Materiales y métodos

Un total de 23 biopsias fueron obtenidas del Archivo del Laboratorio de Histopatología "Pedro J. Tinoco S." de la Facultad de Odontología de la Universidad Central de Venezuela. De acuerdo al diagnóstico histopatológico fueron distribuidas en los siguientes grupos: displasia leve (n= 5), displasia moderada (n= 6), displasia severa (n= 6) y carcinoma espinocelular (n= 6). La edad promedio de estos pacientes fue de 58 años, se incluyeron pacientes de ambos sexos y sólo lesiones en mucosa de revestimiento, tales como, paladar blando, mucosa alveolar y carrillo. En ningún caso los pacientes recibieron tratamiento previo, ni se confirmó la presencia de metástasis. Las características clínico-histopatológicas se muestran en el Tabla 1.

Tabla N° 1. Características clínicas-histopatológicas de las lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal

RA: reborde alveolar; PA: paladar; CA: carrillo.

Las secciones de 4 mm se procesaron mediante la técnica modificada de la inmunoperoxidasa indirecta13 descrita previamente por Tonino y col.11,14. Brevemente, las secciones fueron desparafinadas y rehidratadas. Posterior al bloqueo de la peroxidasa endógena se realizaron las incubaciones con la soluciones del kit LSAB universal (labelled streptavidin biotin peroxidase) de tres componentes (Dako CA, USA). Se empleó el anticuerpo primario policlonal anti-laminina de humano (Dako, CA, USA), dilución 1:50 en tampón fosfato salino (PBS, pH 7,4, 0,1M). La inmunoreacción se detectó con el cromógeno 3-amino-9-etil carbazol (Sigma). El contraste y el montaje se realizó con hematoxilina de Meyer y gelatina glicerinada, respectivamente. Los registros fotográficos se efectuaron en un microscopio Zeiss con cámara adaptable MC63A.

La inmunoreactividad positiva de las células epiteliales y tumorales a la laminina se determinó como leve, moderada e intensa, así como el patrón de distribución en la membrana basal de los vasos sanguíneos se definió como contínua y discontínua.

Resultados

La expresión de laminina en las células epiteliales (Fig. 1,2) y tumorales (Fig. 3, 4) de las distintas patologías estudiadas fue negativo o leve en las displasias leve y moderada, mientras que en las displasias severa y en los carcinomas espinocelulares se observó un patrón granular de la inmunotinción de moderada a intensa. Adicionalmente, se observaron depósitos irregulares con inmunoreactividad positiva a laminina en la matriz extracelular de las displasias severas y carcinomas. Estos resultados sugieren un incremento en la expresión de laminina con la progresión tumoral.

Fig. 1. Expresión de laminina en una lesión de displasia leve. Barra= 10 mm.

Fig. 2. Expresión de laminina en una lesión de displasia moderada. Barra= 10 mm.

Fig. 3. Expresión de laminina en una lesión de displasia severa. Nótese la intensa inmunorreacción en los vasos sanguíneos y células epiteliales. Barra= 10 mm.

En general, la membrana basal de los vasos sanguíneos se evidenció con una inmunoreacción positiva a la laminina. En las displasias leve el 80%, en las displasias moderada el 67% y en las displasias severa el 33 % de los casos, mostraron una membrana basal de forma continua y homogénea (Fig. 1-3), a diferencia de los carcinomas espinocelulares, los cuáles mostraron un patrón de distribución de laminina difuso y discontínuo (Fig. 4). Un resumen de los resultados de la distribución de laminina en las células y la membrana basal vascular de las patologías estudiadas se muestra en la Tabla 2.

Fig. 4. Expresión de laminina con una inmunorrecación intensa en un carcinoma espinocelular. Barra= 10 mm.

Tabla N° 2. Distribución de la expresión de laminina en lesiones premalignas y malignas de la mucvosa bucal.

Cel. Células epiteliales y/o tumorales. Expresión: negativa(-), Leve (+), Moderada (++), Intensa (+++).

MB/VS: membrana basal de los vasos sanguíneos. Continua (C) Discontínua o difusa (D).

Discusión

En el presente estudio se encontraron distintos grados de alteración en la expresión de laminina, en la membrana basal de los vasos sanguíneos con la progresión de displasias a carcinomas bucales, similar a lo descrito en un estudio "in vitro" sobre la transición de hiperplasia a neoplasia en islotes pancreáticos en un modelo murino, que demuestra la alteración de la expresión de laminina en los vasos sanguíneos, con un patrón homogéneo y variaciones morfológicas con la progresión tumoral 15. Los cambios estructurales en la membrana basal se han relacionado con la angiogenesis16. Asimismo, se conoce que la vasculatura tumoral presenta una membrana basal irregular, conformada por cantidades variables de laminina, fibronectina y colágeno, en dependencia del grado de maduración de los vasos sanguíneos17. Por otra parte, se ha sugerido que la laminina-1 se encuentra asociada a las etapas tempranas de la angiogénesis, en tanto que el colágeno tipo IV y el perlecano aparecen más tardíamente en la neoformación vascular18.

En este estudio se encontró un incremento en la positividad de la expresión de laminina en las células epiteliales, así como también en la matriz extracelular con la progresión tumoral. La expresión intracelular de distintas isoformas de laminina y sus subunidades se ha observado en diversos tipos tumorales19,20. La subunidad g2 de la laminina-5 se ha relacionado con la progresión tumoral y un mal pronóstico en el carcinoma esofágico20, de lengua21 y laringeo22. Adicionalmente, se ha determinado que la laminina-1 presenta sitios activos en sus subunidades a-1 y g-1 (peptidos SIKVAV, VAYI, YVRL) que promueven la angiogénesis, el crecimiento y la malignidad5,8. Tales sitios activos pueden ser liberados a partir de la degradación de la matriz extracelular por la acción de las metaloproteinasas de la matriz extracelular, el cual constituye uno de los primeros pasos que ocurren durante la angiogénesis y la invasión8,23.

En conclusión, la expresión de laminina en lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal permitió evidenciar cambios a nivel estructural y funcional que podrían estar relacionados con los procesos de angiogénesis, invasión y metástasis durante la progresión tumoral.

Agradecimientos

Este trabajo fue financiado por el Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico C.D.C.H. de la Universidad Central de Venezuela U.C.V. (N° 03.201.2003).

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Floribel Cedeño B1. Paola Tonino2 1. Profesora Asistente. Cátedra de Histología. Facultad de Odontología, Universidad Central de Venezuela. 2. Profesora Asistente. Centro de Microscopía Electrónica. Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela.