Efecto de la Terbutalina sobre las lesiones inducidas por Etanol en gástrica de ratas
Enviado por Laura Vásquez, José Chirinos, Gloria Rojas.
Se evalúa la acción de la Terbutalina, un agonista de los adrenoreceptores beta dos, sobre la mucosa gástrica de ratas, lesionada con etanol al 60% acidificado con ácido clorhídrico 0.15 N, comparándola con la acción de la Cimetidina, un antihistamínico H2. El tratamiento por vía intraperitoneal con Terbutalina (2.6 umol/kg) o Cimetidina (150 mg/kg) suprimió significativamente la necrosis hemorrágica gástrica macroscópica, al compararse con los controles. Microscópicamente, la Terbutalina, exhibió un efecto estabilizante sobre los mastocitos de la mucosa y de la submucosa gástrica, con una tendencia preferencial a estabilizar los mastocitos de la mucosa. La Cimetidina incrementó significativamente el daño tisular al aumentar la desgranulación mastocitaria. Estos resultados sugieren que la Terbutalina podría actuar como agente protector contra las lesiones gástricas, al reducir la desgranulación de las células cebadas.
Palabras Claves: Desgranulación mastocitaria, lesión mucosa gástrica, Terbutalina, Cimetidina.
Abstract
Effect of Terbutaline on lesions induced by ethanol on the gastric mucous of rats. The effect of Terbutaline, an agonist of the beta-2 adrenergic receptors, on the gastric mucous of rats treated with ethanol at 60% chlorohydrate acid 0.15N was evaluated and compared wich the effect of Cimetidine, an H2 antihistamine. The intraperitoneal treatment with Terbutaline (2.6 umol/kg) or (Cimetidine 150 mg/kg) significantly suppressed the macroscopic gastric hemorrhaging necrosis when compared with controls. Microscopically, Terbutaline demonstrated a stabilizing effect on the mucous mastocites and on the gastric submucous with a preferential tendency for stabilizing the mucous mastocites. The Cimetidine significantly increased the tissue damage while increasing degranulation. These results suggest that the Terbutaline could act as a protective agent against gastric lesions by reducing the degranulation of mast cells.
Key Words: Mastocite degranulation, gastric mucous lesions, Terbutaline, Cimetidine.
Existen estudios que demuestran la importancia de estabilizar la membrana de los mastocitos para prevenir la lesión de la mucosa gástrica, al considerar que la desgranulación y con ella, la liberación de histamina y otros compuestos, incrementan la intensidad de la lesión, pudiendo ella estar relacionada con la fisiopatología de la úlcera péptica y la esofagitis por reflujo (Esplugues et al. 1982, Tabuchi et al. 1993, Rang et al. 1993, Barclay et al. 1995). Agentes bloqueantes de los receptores histaminérgicos H1 como el Ketotifeno (Zaditen), han mostrado acción protectora contra el daño de la mucosa gástrica inducido por etanol, gracias al efecto estabilizante de los mastocitos (Karmely et al. 1991, Wong et al. 1995).
Se ha demostrado también que las drogas estimulantes de los receptores beta dos del Sistema Simpático, previenen el desarrollo de úlceras experimentales inducidas por cirugía, estrés o medios iatrogénicos. Estas drogas, al ocupar sus receptores, favorecen la disminución en la producción de ácido gástrico y la liberación de histamina en el fundus y otros tejidos "in vitro", incrementando la producción de prostaglandina E y el flujo sanguíneo hacia la mucosa (Esplugues et al. 1982, Kogire et al. 1990). En complemento, se ha señalado que la Terbutalina, podría inhibir la secreción de ácido gástrico al impedir la liberación de histamina desde los mastocitos fúndicos, al incrementar los niveles de Somatostatina, por ambos mecanismos a la vez, o por algún otro mecanismo aún no determinado (Thirlby et al. 1988).
El objetivo de este estudio, fue evaluar el posible efecto protector de la Terbutalina (Bricanyl), un agonista selectivo de los receptores beta dos adrenérgicos (Hoffman et al.1996), sobre la mucosa gástrica de ratas, lesionadas experimentalmente con etanol y comparar su efecto con el de la Cimetidina (Cimetidina McK).
Utilizamos 40 ratas Wistar machos, con peso de 150 a 250 gramos y con edad comprendida entre 6 y 8 semanas, que fueron separadas en cuatro grupos de cuatro animales cada uno (Grupo 1: enfermedad control, Grupo 2: vehículo control, Grupo 3: grupo Terbutalina y Grupo 4: grupo Cimetidina). Durante las 24 horas previas al experimento las ratas se mantuvieron en ayunas, con libre acceso al agua hasta el inicio de las pruebas.
La Terbutalina a dosis de 2,6 umol/kg y la Cimetidina a dosis de 150 mg/kg, fueron administradas por vía intraperitoneal a los grupos experimentales correspondientes 30 minutos antes de administrar el etanol acidificado a dosis de 1 ml/rata, por vía oral (etanol al 60% en ácido clorhídrico 0.15N).
Adicionalmente se administró Indometacina (Indocid) a dosis de 5 mg/kg por vía oral una hora antes del etanol acidificado, con la finalidad de inhibir la síntesis endógena de prostaglandinas.
Una hora después de haber administrado el etanol, los animales fueron anestesiados con cloroformo, procediéndose a la resección del estómago. Los estómagos fueron distendidos "in vitro" con 10 ml de formalina al 2%, introduciéndola con una jeringa a través del píloro y luego incidido a lo largo de la curvatura mayor, investigándose la presencia de lesiones macroscópicas (necrosis hemorrágica) en la mucosa gástrica. El fundus gástrico fue seccionado y sometidas a fijación en solución Müler–Formol durante 48 horas, posteriormente fue procesado para estudio histológico (Di’Fiore 1959). Los cortes (30 por grupo experimental) se tiñeron con Azul de Toluidina al 0.5%, recomendado para observar metacromasia (Barka et al.1965) y con ellos se contaron los mastocitos de la mucosa y del tejido conectivo desgranulados (CMMD) y (CMTCD), identificadas como células cargadas con gránulos metacromáticos en proceso de extrusión, en cuatro campos con objetivo de inmersión (1250 x).
La presencia de necrosis hemorrágica gástrica macroscópica fue evaluada mediante el Test Exacto de Fisher. Los datos fueron presentados como medias más o menos su respectivo error estándar (ES), utilizándose posteriormente análisis de varianza (ANOVA) y el Test. de Dunnett. Se consideró significativo en las diferentes pruebas a todo valor de p< 0.05.
Como se muestra en la figura 1, la administración a las ratas , por vía oral de etanol acidificado indujo la aparición de necrosis hemorrágica gástrica macroscópica en todos los animales de los grupos control.
La tabla 1, muestra el efecto de la Terbutalina y de la Cimetidina sobre las medias del contaje de las células mastocíticas de la mucosa y del tejido conectivo, desgranuladas, con su respectivo error estándar. El grupo Terbutalina mostró una tendencia preferencial a disminuir el número de mastocitos desgranulados en el nivel de la mucosa.
Esta lesión al compararla con los controles. El mismo fenómeno se observó con la Cimetidina (p< 0.003), sin encontrar diferencias al comparar entre sí los grupos tratados. Efecto de la Terbutalina y la Cimedetina sobre el valor promedio de mastocitos desgranulados en la mucosa y el tejido conectivo gástrico de ratas tratados con tanol acidificado.
a: p 0.05 vs. enfermedad control; a*. p 0.01 vs. enfermedad control.
b: p 0.001 vs. vehículo control; b*. p 0.01 vs. vehículo control.
c. p 0.002 vs. Terbutalina; c*. P 0.0009 vs. Terbutalina:
CMMD: Células mastocíticas de la mucosa desgranuladas.
CMTCD: Células mastocíticas del tejido conectivo desgranuladas.
Mediante el análisis de varianza se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los diferentes grupos, con el Test de Dunnett se determinó que dicha diferencia se establecía al comparar el grupo Cimetidina con los controles, y que esta resultaba aún más altamente significativa al compararla con el grupo Terbutalina (p<0.0002). Los resultados fueron similares al evaluar el contaje de las células mastocíticas del tejido conectivo en proceso de extrusión.
Se ha demostrado que bajas concentraciones de etanol y ácido clorhídrico producen "citoprotección adaptativa", es decir, actúan como irritantes leves de la mucosa gástrica, incrementando de manera simultánea la síntesis endógena de prostaglandinas como un mecanismo de defensa para mantener la integridad celular de la mucosa gastrointestinal (Robert et al. 1983). Las prostaglandinas y sus análogos inhiben la necrosis de la mucosa gástrica, inducida por diversos agentes irritantes (Tabuchi et al. 1993).Con base en lo anterior se empleó un inhibidor de la síntesis endógena de prostaglandinas, la Indometacina, para descartar que el efecto protector de la Terbutalina estuviese determinado por la síntesis endógena de prostaglandinas locales.
En el presente trabajo se demuestra que la administración de etanol acidificado a ratas albinas produjo necrosis hemorrágica de la mucosa, así como también edema y dilatación capilar de la serosa gástrica, acompañado de desgranulación de las células mastocíticas de la mucosa y del tejido conectivo en el nivel fúndico. Estos hallazgos confirman lo referido por otros autores (Tabuchi et al. 1993, Tabuchi et al. 1995, Wong et al. 1995). En este trabajo encontramos que el etanol acidificado produjo necrosis hemorrágica gástrica macroscópica en todas las ratas control, mientras que los grupos tratados mostraron un efecto protector significativo sobre estas lesiones. La aparición de lesión gástrica en los grupos control confirma una vez más el efecto lesivo de esta sustancia, coincidiendo con lo reportado por diversos autores (Tarnawasky 1990, Tabuchi et al. 1993), pues es conocido que el etanol actúa como un irritante directo y además favorece indirectamente la descarga mastocitaria al estimular sus terminaciones vagales aferentes (Wong et al. 1995).
Contrariamente, detectamos el efecto protector de la Cimetidina sobre la necrosis macroscópica, lo cual difiere de los resultados de otros autores, quienes han encontrado que la Cimetidina y otros antagonistas de los receptores H2, son completamente inefectivos en la protección de la mucosa gástrica contra la necrosis causada por etanol (Tarnawaski et al. 1985, Tarnawaski et al. 1990). La diferencia entre estos resultados podría deberse al menos en parte, a que en las investigaciones previas, el etanol se usó a una concentración de 100%, en tanto que en este trabajo fue utilizado a concentración de 60%, proporción ésta más apropiada al contenido alcohólico habitual de la mayoría de las bebidas alcohólicas. No obstante, la administración de Cimetidina sí produjo alteraciones microscópicas importantes, similares a las señaladas previamente en otras investigaciones (Tarnawasky et al. 1990, Wong et al. 1995).
Está demostrado que las drogas agonistas beta dos adrenérgicas, deprimen la secreción ácida gástrica al estimular la liberación de los inhibidores de su secreción (péptido inhibitorio gástrico, péptido YY y somatostatina). También actúan inhibiendo la salida de histamina, estimulante no gastrinémico de la secreción de ácido gástrico (Thirby et al. 1988, Kogire et al. 1990) y también disminuyen la extravasación de proteínas plasmáticas en diferentes modelos experimentales (Minnear et al. 1986), e incrementan el flujo sanguíneo de la mucosa y la síntesis de prostaglandinas (Esplugues et al. 1982).
La tendencia protectora de la Terbutalina sugiere un efecto inhibidor de la liberación de mediadores inflamatorios desde las células mastocíticas mucosas, aunque no hubo diferencias estadísticamente significativas al compararlas con la de los controles, hecho atribuible al bloqueo previo de la síntesis endógena de prostaglandinas locales por la Indometacina. Sin embargo, la Terbutalina sí produjo un efecto estabilizador altamente significativo al compararla con el grupo tratado con Cimetidina. Llama la atención que la Terbutalina mostró una tendencia a estabilizar los mastocitos mucosos únicamente, lo que resulta comparable con el fenómeno demostrado por otros fármacos como el Cromoglicato de sodio (Cromolin) y el Doxantrazol, exhibiendo el primero de ellos actividad estabilizante exclusiva sobre las células mastocíticas del tejido conectivo, y el segundo, sobre éstas y también sobre los mastocitos de la mucosa (Scott et al. 1993, Kubes et al. 1994).
La significativa desgranulación mastocitaria observada con la Cimetidina, al compararla con los controles y con el grupo tratado con Terbutalina, podría explicarse por el bloqueo del retrocontrol negativo ejercido por la histamina sobre los receptores H2 de las células mastocíticas, anulando sus propiedades antiinflamatorias e inmunosupresoras (Al-Haboubi et al. 1982, Rixen et al. 1996). No obstante, es importante señalar que el mecanismo de protección gástrica de la Cimetidina se pone de manifiesto al bloquear los receptores H2 ubicados en la superficie de la membrana de las células parietales, inhibiendo el efecto estimulante que desencadena la histamina para favorecer la secreción de ácido gástrico (Burkhalter et al. 1994).
Se ha confirmado que la administración a ratas albinas de etanol acidificado produce necrosis hemorrágica macroscópica en el estómago de los animales, acompañada de desgranulación de las células cebadas. La Terbutalina y la Cimetidina mostraron un efecto protector significativo en la mucosa gástrica para la necrosis hemorrágica causada por etanol. Microscópicamente, la Terbutalina disminuyó la desgranulación de las células cebadas de la mucosa y del tejido conectivo, estabilizando preferencialmente los mastocitos mucosos, mientras que la Cimetidina incrementó la lesión hística al aumentar significativamente la desgranulación mastocitaria en el nivel mucoso y submucoso.
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Laura Vásquez
En En MedULA, Revista de Facultad de Medicina, Universidad de Los Andes. Vol. 6 Nº 1-4. 2002. (2005). Mérida. Venezuela. José Chirinos, Gloria Rojas. Universidad de Los Andes. Facultad de Medicina. Departamento de Farmacología y Toxicología. Av. Don Tulio Febres Cordero, Código Postal 5101-A. Apartado Postal 103. Mérida. Venezuela. Trabajo financiado por el Consejo de Desarrollo Científico Humanístico y Tecnológico. Proyecto M-512-95-03-D.