Efecto de algunos reguladores del crecimiento y el Fitomás-E en la micropropagación de Musa sp. variedad FHIA-18 (AAAB)
Enviado por Jorge Liusvert Pérez Pérez
RESUMEN
En la actualidad, diversos cultivares de musáceas son cultivados usando las técnicas de cultivo de tejidos, constituyendo la base de la propagación masiva de plantas vigente en muchos países. El Fitomás-E, bioestimulante de origen cubano obtenido a partir de la Caña de azúcar (Saccharum officinarum L.) abre nuevas posibilidades al ser utilizado por primera vez en condiciones in vitro. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del Fitomás-E en la micropropagación del banano FHIA-18. En la fase de multiplicación in vitro se empleó un medio de cultivo con las sales y vitaminas MS (Murashige y Skoog, 1962), Tiamina (1,0 mg.l-1), sacarosa 3,0 % y 6-bencilaminopurina (BAP) (0,0; 2,0; 4,0 y 6,0) mg.l-1, obteniéndose 2,48 brotes por explante a razón de 4,0 mg.l-1; posteriormente se evaluó el efecto del Fitomás-E a concentraciones de (0,1; 0,5; 1,0) ml.l-1 solo y combinado con BAP 4,0 mg.l-1 lográndose 1,5 brotes a 0,1 ml.l-1 Fitomás-E combinado con 4,0 mg.l-1 BAP. Durante el enraizamiento in vitro se empleó un medio de cultivo con las sales MS, sacarosa 4,0 % y (0,1; 0,5) ml.l-1 de Fitomás-E solo y combinado con ácido indol-3-acético (AIA) (1,3 mg.l-1), evidenciándose un incremento en la emisión de raíces en todos los tratamientos combinados. En condiciones de aclimatización el Fitomás-E (0,1 ml.l-1) junto al tratamiento con 10 mg.l-1 de ácido naftalenacético (ANA) favorecieron el porcentaje de supervivencia de las plantas.
Palabras claves: aclimatización, bioestimulante, cultivo de tejidos, in vitro, propagación.
ABSTRACT.
At the present, diverse musaceas cultivares is cultivated using the tissue culture techniques, constituting the base of the massive propagation of plants in many countries. The Fitomas-E, bioestimulante of Cuban origin obtained starting from the Sugarcane (Saccharum officinarum L.) opens new possibilities when used for first time under conditions in vitro. The objective of this work was to evaluate the effect of the Fitomas-E in the micropropagación of the banana FHIA-18. In the multiplication phase it was used a culture medium firstly with the salts and vitamins MS (Murashige and Skoog, 1962), Tiamine (1,0 mg.l-1), sucrose 3,0% and 6-benzylaminopurine (BAP) (0,0; 2,0; 4,0 and 6,0) mg.l-1, being obtained 2,48 buds by explante to reason of 4,0 mg.l-1; later on the effect of the was evaluated Fitomas-E to concentration of (0,1; 0,5 and 1,0) ml.l-1 alone and combination with 4,0 mg.l-1 BAP obtained 1,5 buds whit the combination 0,1 ml.l-1 Fitomas-E and 4,0 mg.l-1 BAP. Rooting was used a culture medium with the salts MS, sucrose 4,0 % and (0,1; 0,5) ml.l-1 of Fitomas-E alone and combinate with indole-3-acetic acid (IAA) (1,3 mg.l-1), being evidenced an increment in the emission of roots in all the combined treatments. Under acclimatization conditions being shown that the Fitomas-E (0,1 ml.l-1) joint to the treatment with 10 mg.l-1 of naphthalene acid (NAA) favored the percentage of survival of the plants.
Key words: acclimatization, bioestimulante, tissue culture, in vitro, propagation.
INTRODUCCIÓN
Los plátanos y bananos constituyen a nivel mundial el principal alimento para cerca de 400 millones de personas, con una producción anual de alrededor de 95.1 millones de toneladas, representando los cultivos de mayor importancia económica en los países tropicales y subtropicales después del arroz, trigo y maíz (López et al., 2000).
En el continente Americano, Ecuador es el primer exportador de banano a nivel mundial y el segundo productor en el mundo de esta fruta; sembradas mayormente por cultivares tipo "Cavendish" (SICA 2002).
La entrada a Cuba en noviembre de 1990 de la enfermedad conocida como "Sigatoka negra" causada por el hongo patógeno, Mycosphaerella fijiensis Morelet, afectó la producción de las empresas estatales dedicadas a estos cultivos (Orellana et al., 2002). A partir de estudios realizados con materiales procedentes de la Federación Hondureña de Investigaciones Agrícolas (FHIA), se procedió al desarrollo de plantaciones de clones que ocupan 8 000 ha, con buenos resultados productivos (Barranco 2001).
En nuestros días se efectúan ensayos con sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal entre ellas el Fitomás-E obtenido en Cuba a partir de la Caña de azúcar, lo que constituye una ventaja desde el punto de vista económico. Los estudios realizados son restrictos a condiciones de maceta o en campos abiertos, por tanto, comprobar sus efectos en condiciones in vitro y semicontroladas de casa de cultivo es un campo en el que no se ha avanzado y abre nuevas posibilidades para la investigación, al poder ser empleado en combinación con otros reguladores del crecimiento en los medios de cultivo.
Teniendo en cuenta, que actualmente tanto en Cuba como a nivel internacional no existe información sobre el efecto del Fitomás-E en la micropropagación de bananos, se propuso como hipótesis de trabajo que con la aplicación del Fitomás-E en los medios de cultivo es posible incrementar el coeficiente de multiplicación, el enraizamiento in vitro y la aclimatización de las vitroplantas de FHIA-18. Para cumplimentar esta afirmación se planteo como objetivo, evaluar el efecto del Fitomás-E en la micropropagación de Musa sp. variedad FHIA-18 (AAAB).
MATERIALES Y MÉTODOS
La investigación se desarrolló en el Centro de Estudios de Biotecnología Vegetal de la Universidad de Granma, Cuba, en el período Enero – Mayo, 2007. Como material vegetal inicial se emplearon vitroplantas de Musa sp. cv. FHIA-18 (AAAB), procedentes de la "Biofábrica" de Granma, en fase de establecimiento in vitro.
Los reguladores del crecimiento fueron adicionados al medio de cultivo antes de su esterilización. l pH de los medios de cultivo se utilizó el pHmetro Basic 20 (CRISON)® ajustándose a 5,8 previo a la esterilización en autoclave vertical (BK-75)® a 121 ºC de temperatura y 1,2 Kgf.cm-3 de presión durante 20 minutos.
Se emplearon frascos de vidrio de 250 ml de capacidad con 30 ml de medio de cultivo semisólido gelificado con 8,0 gramos de Agar-E (BIOCEN)®. El cocinado de los medios de cultivo se realizó con empleo de un Microwave marca (LG)®.
Los medios de cultivo se mantuvieron en condiciones de reposo durante tres días antes de su empleo para comprobar que mantuvieran las condiciones de asepsia necesarias para su utilización.
Los trabajos de laboratorio se realizaron bajo condiciones asépticas en cabina de flujo laminar horizontal, empleando para su desinfección alcohol 70%. El instrumental empleado se esterilizaron con esterilizador eléctrico modelo (STERI-250)® a 250 ºC de temperatura. El manejo de los brotes para la disección, corte y extracción de los tejidos fenolizados, se realizó en platos de aluminio esterilizados en autoclave durante cuarenta minutos.
Los experimentos en condiciones in vitro se desarrollaron en cámara de crecimiento con empleo de la luz solar entre 3 500 y 4 000 lux, temperatura constante de (28 ± 2) ºC y humedad relativa de (80 – 85) %.
Durante la fase de multiplicación se realizaron tres subcultivos a medio de cultivo fresco cada 21 día momento en el cual se realizaron las evaluaciones experimentales; en la fase de enraizamiento se efectuó un solo cultivo con evaluación a los 28 días, a partir de este momento las vitroplantas pasaron a su aclimatización con evaluaciones a los 15 y 30 días.
En condiciones in vitro se colocó un explante por frasco de cultivo y se evaluaron 20 explantes por tratamiento, representando cada frasco una repetición por tratamiento; en las condiciones ex vitro se evaluaron 20 vitroplantas por tratamiento representando cada muestra una repetición.
Se empleó un diseño experimental completamente aleatorizado, dado las condiciones de homogeneidad en las que se desarrolló la investigación. Los datos cumplieron los supuestos de distribución normal a través de las pruebas de Kolmogorov-Smirnov y la homogeneidad de varianza mediante la prueba de Bartlet.
Se efectuó un análisis de varianza clasificación simple y para la comparación múltiple de medias se empleo la prueba de Tukey (0,05) mediante el programa computacional SAS® versión 8,2 para ambiente del sistema operativo Windows de Microsof®; los datos porcentuales fueron procesados mediante una prueba de comparación de proporciones del paquete estadístico STATISTIX versión 6,0.
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