Acción del Piroxicam en ratones hembras Cepa C57BL16 con Melanoma B16F1 (página 2)

MATERIALES Y MÉTODOS

Se utilizaron 33 ratones hembras de la Cepa C57BL16, con peso aproximado de 18 gr. y de 8 semanas de edad, los cuales fueron obtenidos del Laboratorio de Farmacología y Toxicología de la Facultad de Medicina. Para conservar sus endogamicidad se aparearon parejas de hermanos a partir de 50 parejas obtenidas originalmente del Jackson Laboratory Mainer (USA) a través del Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (WIC) en el alo 1977.

Los animales seleccionados se distribuyeron en 2 grupos, uno formado por 17 ratones hembras tratados con Piroxicam y otro formado por 16 ratones hembras como grupo control Se ubicaron en jaulas y fueron alimentados durante el experimento con ratarina granulada y agua "Ad libitum".

El primer día del experimento los ratones del grupo tratado comenzaron a recibir por vía intraperitoneal una dosis diaria de Piroxicam de 8mg/kg de peso, preparado en solución acuosa de bicarbonato de sodio 0.1. N (Northway et., 1990), a una concentración de 0.16 mg de Piroxicam /ml de solución. De la misma forma los animales del grupo control comenzaron a recibir desde el primer día del experimento una solución acuosa de bicarbonato de sodio 0. 1N.

Una semana después de iniciado el experimento, los animales de ambos grupos fueron inoculados con 50.000 células y viables de melanoma B 16F1 (Fidler y Nicolson, 1976; Hart y Fidler, 1980) en la pata derecha mediante inyección intramuscular siguiendo la técnica de exclusión de Axul Trypan (Malavé, 1978 citado por Urbina de V, 1980).

Para la recolección de los datos a partir del día de inoculación se midió diariamente el diámetro dela pata derecha de los animales en el sitio de la inyección con un vernier metálico, hasta el último día del experimento. Tres semanas después de la inoculación se sacrificaron los animales de ambos grupos (Hart y Fidler, 1980; Kimura y Xiang, 1986) mediante sobredosis de cloroformo y se disecó el tumor primario de cada animal. A los tumores primarios se les determinó el peso en gramos, utilizando balanza electrónica. El volumen tumoral se calculó en ml, sumergiendo el tumor en una probeta de 50 ml con agua destilada, correspondiendo el volumen tumoral desplazado por el tumor (Wood, 1954; citado por Urbina de V, 1980). Para determinar el diámetro geométrico se midió el largo, el ancho y el alto del tumor con un vernier: el diámetro geométrico se calculó como la raíz cúbica del producto de las medidas obtenidas (Stackpole et. al., 1991).

RESULTADOS

Con respecto al peso de los animales, en el grupo de ratones hembras tratados, el peso inicial promedio fue de 18.23 + 2.26 g y el peso final promedio fue de 19.08 +1.91 g con diferencia de 0.85g la cual no fue estadísticamente significativa ("t" de Student:-1.187 P<0.05).

Para analizar la diferencia en el crecimiento del tumor primario 'in situ" entre ambos grupos de animales, se comparó el promedio del diámetro correspondiente a los días 7, 14 y22 de tratamiento post inoculación. El día 7 el diámetro de la pata file 3.18 + 0.26mm y 3.06 + 0.13mm en el grupo de ratones hembras tratados y controles respectivamente, con diferencia entre ambos grupos de 0.12mn la cual no fue estadísticamente significativa ("t" de Student: 1.660, P>0.05). El día 14 el promedio del diámetro de la parte fue de 5.44 + 1.25mn en el grupo de ratones hembras control, con una diferencia entre ambos grupos de 1.85mn, estadísticamente significativa ("t" de Student: 5.844, P<0.05). El día 22, el promedio del diámetro tumoral fue 11.5 + 1.91mn en el grupo de ratones hembras control fue 11.62 + 2.39mn con una diferencia entre ambos grupos de 0.09mn la cual no fue estadísticamente significativa ("t" Student: -0.127, P>0.05;) .

Fig. 1. Acción del Piroxicam en ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1. Crecimiento tumoral diario in situ en milímetros, 17 ratones hembras tratadas y 16 control. Valores absolutos promedio.

El peso promedio del tumor primario disecado fue 3.88 + l.08g en el grupo de ratones hembras tratados y 2.5 + 0.61g en el grupo de ratones hembras control con diferencia de 1. 38g la cual fue estadísticamente significativa ("t" de Student:4.489, P<0.05).

Fig. 2. Acción del Piroxicam en ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1. Tumor primario disecado. Peso en gramos. Ratones Hembras tratadas y control. Valores absolutos.

El volumen del tumor primario disecado tuvo un promedio de 3.53 + 1.29ml y 2.31 + 0.73ml en el grupo de ratones hembras tratados y ratones hembras control respectivamente, con diferencia entre ambos grupos de 1.22 ml la cual fue estadísticamente significativa ("t" de Student: 3.3J2 P<0.05).

Fig. 3. Acción del Piroxicam en ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1. Tumor primario disecado. Volumen en milímetros. Ratones Hembras tratadas y control. Valores absolutos.

El promedio del diámetro geométrico del tumor primario disecado file 18.3± 0.76 mm en el grupo de ratones hembras tratados y en el grupo de ratones hembras control fue de 16.75 ± 1.39 mm con una diferencia de 1.60 mm, estadísticamente significativa ("t" de Student: 2.082, P<0.05 Fig. 4).

Fig. 4. Acción del Piroxicam en ratones hembras cepa C57BL/6 con Melanoma B16F1. Tumor primario disecado. Diámetro geométrico en milímetros. Ratones Hembras tratadas y control. Valores absolutos.

DISCUSIÓN

Se observó un aumento de peso en ambos grupos lo cual se explica por el desarrollo del Melanoma B16F 1 en la pata de los animales, no obstante no se corresponde el aumento de peso de los animales con el peso promedio del tumor primario disecado, ya que el primero fue menor que el segundo; sin embargo, el aumento de peso sólo fue significativo (P<0.05) en los animales del grupo control, resulta-dos coinciden con los reportados por Reddy et al, (1987), quienes observaron que el Piroxicam administrado en la dieta no afectó el peso de ratas machos con cáncer de colon.

En cuanto a la presencia del tumor primario, observamos que el Piroxicam inhibió el desarrollo del Melanoma B16F 1, en contraste con los reportes de estudios en los cuales se ha demostrado la acción inhibitoria del Piroxicam sobre la formación de tumores en el intestino delgado y colon de ratas, así como la disminución en la incidencia de colonias neoplásicas y en el número de adenocarcinomas en ratas sometidas a irradiación pélvica (Pollard et aL, 1983 1987; Northway et aL, 1990).

Sobre el crecimiento del tumor primario "in situ" el Piroxicam estimuló el crecimiento diario del tumor primario el cual fue el mayor que en los animales del grupo control, durante la segunda y tercera semana del experimento, aunque con diferencia significativa (P<0.05) solo para el día 14.

En cuanto a las dimensiones del tumor primario disecado observamos que los promedios de peso, volumen y diámetro geométrico fueron significativamente mayores (P<0.05) en el grupo de ratones hembras tratados con Piroxicam.

Nuestra hipótesis de trabajo se basó en el concepto de que los tejidos neoplásicos producen niveles mayores de prostaglandinas (PG) que los tejidos normales, esto ha sido demostrado tanto en humanos como en animales de experimentación portadores de neoplasias (Goodwin et aL, 1980; Levine, 1981; Tilden y Balch, 1981: Laus et aL, 1987: Valdéz y Perdigón, 1991). Existen evidencias que indican que las PG, especialmente la PGE, está involucrada en la iniciación, promoción y progresión de procesos tumorales en forma directa por su acción pro inflamatoria (Fischer, 1985; Trosko, 1985; Fletcher, 1989; citados por Valdéz y Perdigón, 1991; Goodwin et al, 1980) o indirectamente por afectar la respuesta inmune, ya que a través del aumento de PG, los tumores se hacen resistentes a las defensas inmunológicas del huésped (Goodwin et aL, 1980; Tilden y Balch, 1981). Sin embargo, el rol pro-cáncer de la PGE no es evidente en todos los sistemas experimentales. Las PGE Inhiben la proliferación de linfocitos y el crecimiento de células tumorales en algunos modelos experimentales (Goodwin et al., 1980), de tal manera que en estos modelos, la administración de medicamentos inhibidores de la síntesis de PG estimulan el crecimiento tumoral. Existen evidencias que las drogas que inhiben la síntesis de PG pueden inhibir o estimular el crecimiento tumoral, lo cual depende de la línea celular sobre la cual actúen estas drogas y de la dosis utilizada.

Probablemente los resultados obtenidos en la presente investigación se deben al posible efecto inhibidor de las PG sobre la replicación celular del Melanoma B16F1, razón por la cual el Piroxicam aumentó las dimensiones tumorales, lo cual coincide con los resultados de trabajos realizados por otros autores (Santore et aL, 1976; Favalli et aL, 1980) quienes observaron que la proliferación celular del melanoma B 16 "in vitro e in vivo, aumentó significativamente con la administración de Indometacina e Hidrocortisona (drogas Inhibidoras de la síntesis de PG). Mientras que la administración de una análogo de la PGE Inhibió la replicación celular de Melanoma B16 "in vitro in vivo" en ratones hembras C57BL/6 (Santoro et aL,1977).

CONCLUSIONES

1. El Piroxicam administrado a la dosis de 8 mg/kg de peso no afectó significativamente (P<0.05)el peso de los ratones hembras C57BL/6 con Melanoma B16F1.

2. El Piroxicam no Inhibió el desarrolló del tumor primario (Melanoma B16F1).

3. El Piroxicam aumentó significativamente (P<0.05) las dimensiones del tumor primario disecado.

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