Determinación del linfocito b en biopsias de tejido gingival de pacientes con periodontitis crónica

• Materiales y métodos
• Aspectos estadísticos
• Resultados
• Discusión
• Conclusiones
• Referencias

RECONOCIMIENTOS: Este trabajo fue financiado por el centro de investigaciones de la Universidad El Bosque.- Bogotá, Colombia, Sur América.

RESUMEN: OBJETIVO: El propósito del estudio fue evaluar la presencia y localización del linfocito B a través de sus moléculas CD19, CD20 y CD22, en tejido gingival de pacientes con periodontitis crónica según su expresión y variabilidad entre pacientes, sitios del mismo paciente y sus diferencias en tejido epitelial y conectivo.

MATERIALES Y METODOS: Se evaluaron biopsias de 10 sitios de pacientes con diagnóstico de periodontitis crónica evaluadas por duplicado para un total de 20 muestras, las cuales fueron procesadas para su análisis histológico, inmunohistoquímico, e histomorfométrico.

RESULTADOS Y DISCUSION: Los resultados mostraron alta expresión de CD22 en un 57.7% en comparación con CD19 cuya expresión fue de 21.2% y CD20 en un 26.7%, lo cual indicaría que esta etapa de la enfermedad presenta gran porcentaje de linfocitos B maduros activados. En tejido conectivo se observó mayor expresión de estas moléculas frente a epitelio encontrándose diferencia significativa para CD22. Se encontraron diferencias significativas entre los pacientes sugiriendo que la expresión de estas proteínas podría variar entre individuos. Respecto al comportamiento entre sitios del mismo paciente, el sujeto 1 mostró gran variabilidad entre los sitios para el marcador CD20 no obstante la expresión fue homogénea para CD19 y CD22 mostrando un comportamiento menos variable. Para el paciente 2 los marcadores fenotípicos no mostraron diferencias significativas.

CONCLUSIONES: Los resultados demuestran que las células B activadas están presentes en periodontitis crónica evidenciándose la expresión de CD19, CD20 y CD22 en los tejidos analizados en biopsias de pacientes con periodontitis crónica.

PALABRAS CLAVE: Inmunidad humoral, respuesta inmune, linfocito B, inflamación crónica, CD19, CD20, CD 22, periodontitis.

ABSTRACT: PURPROSE: The aim of this study was to evaluate the presence and location

of the B lymphocyte by its molecules CD19, CD20 and CD22, in gingival tissues from patients with chronic periodontitis according to its expression and variability between patients, among sites within the same patient and his differents among tissues.

MATERIAL AND METHODS: Biopsies from 10 patients with a diagnostic criteria of chronic periodontitis were evaluated by duplicate for a total amount of 20 samples for histological, immunohistochemical and histomorphometric analysis.

RESULTS AND DISCUSSION: The results showed a high expression of CD22 (57.7%), in contrast with the expression of CD 19 (21.2%) and CD 20 (26.7%), indicating a high proportion of activated mature B lymphocities in this stage of the disease. The connective tissue showed the mayor expression of this molecules making a significant stadistical difference with those shown in epithelium for CD 22. Significant differences were seeing between patients. Intraindividual site behavior showed high variability in subject 1, for CD 20 markers and homogeneous expression for CD 19 and CD 22. No significant differences were observed for phenotypic markers in patient 2.

CONCLUSSIONS: Results demonstrates the presence of activated B cells in chronic periodontitis patients, with respect to CD 19, CD 20 and CD 22 markers.

KEY WORDS: Humoral Immunity, immune response, B lymphocyte, chronic inflamation, CD 19, CD 20, CD 22, periodontitis.

INTRODUCCIÓN

La periodontitis crónica es una enfermedad infecciosa destructiva que produce inflamación en los tejidos de soporte del diente, pérdida ósea y de inserción que se caracteriza por la formación de bolsas y/o reseción gingival. Esta plenamente reconocido que es la forma de periodontitis que con mayor frecuencia ocurre. Su prevalencia y severidad aumenta con la edad, afectando a un número variable de dientes con tasas variables de progresión. Es iniciada y mantenida por la placa dental pero los mecanismos de defensa del huésped juegan un papel integral en su patogénesis. (2.4, 11)

El papel biológico de los linfocitos B en el conjunto de la respuesta inmune es central ya que en este tipo celular reside el control de la respuesta humoral. Estas células cuando son activadas proliferan y se diferencian es células plasmáticas productoras de anticuerpos que hacen posible la neutralización y eliminación del antígeno que estímulo su formación. (1)

La proliferación y diferenciación de las células B es un proceso verdaderamente complejo dirigido y regulado a través de interacciones con otras muchas células y por un grupo de moléculas sobre la superficie celular de los linfocitos B tales como CD19, CD20, CD22, CD23 entre otras, cuya significante alteración en su función o expresión podría predisponer a la producción de autoanticuerpos. La molécula CD19 es expresada por los linfocitos pre-B hasta el proceso de diferenciación a célula plasmática, la proteína CD20 es expresada también durante los tempranos estadios de célula pre-B y persiste hasta su diferenciación y la molécula CD22 es expresada en el citoplasma de las células B progenitoras y células pre B pero es encontrada solamente sobre la superficie de células B maduras. El CD22 es una molécula de adhesión que puede funcionar en interacciones homotípicas Y/o heterotípicas y su expresión incrementa después de la activación y desaparece en la diferenciación. Además se ha sugerido que una forma soluble de CD22 inhibe la activación de CD3 por la célula T lo cual puede ser importante en las interacciones T-B. (5, 6, 17,21)

Algunos estudios inmunológicos enfocados a la identificación de linfocitos involucrados en la enfermedad periodontal inflamatoria crónica mostraron que en humanos esta enfermedad es esencialmente una lesión de células B con sólo una pequeña población de células T. Page y Schroeder(14) en 1976 describieron los cambios sucedidos a nivel periodontal causados por placa bacteriana y expusieron que en una lesión establecida y avanzada había un predominio de células plasmáticas, hallazgos que sirvieron para esclarecer la patogénesis de la enfermedad periodontal pero siendo limitados a las técnicas para estudios in vitro desarrolladas en la época.

Mackler (12) en 1977 confirmó estos hallazgos sugiriendo el cambio de población celular presente en periodontitis donde encontró un mayor número de linfocitos expresando inmunoglobulinas a nivel de los tejidos de los pacientes con periodontitis. Por otro lado Sinden y Walker (18) en 1979 encontraron una predominante población de células T en pacientes con periodontitis, detectada también por inmunofluorescencia, pero a diferencia del estudio anterior estos pacientes fueron sometidos a fase higiénica previa a la obtención de las muestras, por lo cuál se presume que pudo existir un cambio poblacional a favor de las células T.

Los avances en técnicas inmunológicas han llevado al uso de anticuerpos monoclonales que han permitido una amplia identificación celular .Estudios más recientes como el de Seymour y col (16) en 1985 mostraron un mayor porcentaje de células T en relación a las células B donde los pacientes también fueron tratados mediante fase higiénica antes de la toma de muestras. En este estudio se encontró que la mayoría de linfocitos B eran linfocitos maduros.

Hallazgos diferentes reportó Reinhardt y col en 1988(15) quién encontró mayor población de células B en especial en el tercio surcular con un 48.5% y una población de células T con un 26.7%.

Existe controversia en los estudios que han tratado de identificar cual es la población predominante en estados avanzados de la enfermedad periodontal, pero aún son pocos los que han tratado de clarificar la actividad funcional de estas dos poblaciones celulares. Algunos estudios han sugerido un imbalance de citocinas a nivel local en sitios afectados por periodontitis que puede contribuir al desarrollo de una elevada respuesta del linfocito B. La alta producción de IL5 e IL6 en sitios inflamados tiene la habilidad de regular los estadios del desarrollo de esta célula para inducirla a la conversión de célula plasmática. (8,9) Se ha sugerido la activación policlonal de las células B que puede desencadenar la producción de auto-anticuerpos, la destrucción de tejidos propios a través de la formación de inmunocomplejos y la activación del complemento. Por otro lado los lipopolisacáridos de la bacteria reconocidos como potentes activadores policlonales de la célula B conducen a la producción de IL1 por estas células llevando a la reabsorción ósea. (3, 19,20)

El propósito de este estudio fue determinar la localización y distribución de la célula B CD19+, CD20+ y CD22+ en epitelio y tejido conectivo en biopsias de pacientes con periodontitis crónica avanzada para establecer su comportamiento en cada sitio evaluado, entre sitios del mismo paciente y entre sitios evaluados entre pacientes.