Evaluación de la actividad in vitro e in vivo de tinturas de Eucalyptus spp.

1. Resumen
3. Materiales y métodos
4. Análisis estadístico
5. Valoración económica
6. Resultados y discusión
7. Referencias.
8. Anexo

Su uso como antisépticos mamarios

Resumen

En una primera fase se evaluó la actividad antibacteriana in vitro de tinturas de cortezas de Eucalyptus citriodora Hook y Eucalyptus saligna Sm. sobre 2 cepas de Staphylococcus aureus (referente y salvaje). La cepa autóctona resultó resistente a penicilina, gentamicina e intermedia a estreptomicina. Los extractos de Eucalyptus citriodora Hook (20 y 83% de alcohol) resultaron más eficaces que sus similares de E. saligna Sm., y ambos superiores a los antibióticos penicilina y gentamicina. No hubo diferencia significativa en la sensibilidad de ambas cepas hacia los extractos evaluados.

A partir de dichos resultados se seleccionó la tintura (20% de etanol) de Eucalyptus citriodora Hook (5 g/L) para el tratamiento de ganado vacuno de ordeño afectado de mastitis subclínica. Se aplicaron 5 mL de la tintura por vía intramamaria durante 7 días. El reactivo de Schlam posibilitó la detección de la enfermedad y su evolución durante el tratamiento de 44 cuartos correspondientes a 18 animales. La tintura ejerce una acción curativa a partir de las 72 horas, resulta de fácil elaboración y económica con respecto a las otras opciones de tratamiento.

Palabras claves: mastitis; antisépticos mamarios; Eucalyptus; Eucalyptus citriodora.

Introducción

En términos de pérdidas económicas la mastitis es la enfermedad más importante de la industria ganadera debido a la gran disminución en la producción láctea y pérdida de cuartos glandulares afectados. Cálculos recientes revelan que la afección representa el 30% del costo total de todas las enfermedades padecidas por el ganado vacuno que, por este concepto, ascienden a 2000 millones de dólares en Estados Unidos (Armenteros, 2000).

Desde que Franck (1876, citado por Heidrich y Renk, 1978) demostró que las mastitis eran producidas por agentes microbianos, los esfuerzos terapéuticos se encaminaron a la aplicación intracisternal de productos para eliminar dichos gérmenes y lograr la curación de la mama. A tal fin se aplicaron soluciones de fenol, alumbre, ácido bórico-alcanfor, cresol, glicerina, etc. que, aunque dieron buenos resultados terapéuticos, afectaban la mama tratada o inutilizaban su capacidad productora de leche (Heidrich y Renk, 1978). La era antibiótica del pasado siglo abrió nuevas perspectivas. Los mismos, sin embargo, constituyen un residual que ejerce gran influencia en la calidad de la leche, sus derivados y la incidencia en la salud pública, además de potenciar la emergencia de cepas antibiorresistentes (Barreto et al., 1991; Mediavilla et al., 1997; Armenteros, 2000).

Durante milenios el hombre se ha valido de las plantas para combatir las más diversas enfermedades (Roig, 1974). Eucalyptus constituye un género bien distribuido en Cuba y que en los últimos años ha sido empleado con diversos fines en medicina veterinaria y humana (Bertha Velázquez et al., 1991; Barreto et al., 1993ª, b, c, 1995ª, b, 2005). Se ha comprobado que posee propiedades antibacterianas in vitro frente a Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Spaphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae (Yadila Gómez et al., 1994; Castell et al., 1994; Barreto et al., 1995a, b, 2005, 2006). Todas las especies mencionadas poseen potencialidad para provocar mastitis, fundamentalmente las dos últimas (Planas, 1979).

Tomando en cuenta lo antes expuesto se establecieron los siguientes objetivos para esta investigación:

2. Evaluar la acción in vitro de tinturas (83% y 20%) de cortezas de Eucalyptus citriodora Hook. y Eucalyptus saligna Sm sobre cepas de Staphylococcus aureus.
3. Comparar in vitro la actividad antibacteria de dichos extractos frente diversos antibióticos.
4. Aplicar la tintura más efectiva in vitro a vacunos de ordeño con mastitis subclínica para evaluar su potencial antiséptico in vivo.
5. Determinar los costos de este último debidos a: elaboración y tratamiento con respecto a los ocasionados por los tratamientos convencionales.

Materiales y métodos

Colecta

Las cortezas de Eucalyptus citriodora Hook (17 años) y Eucalyptus saligna Sm (26 años) se colectaron durante las primeras horas de la mañana en la Empresa de Investigación Forestal de Camagüey. Las muestras se tomaron a una altura de 1m con respecto al suelo. En todos los casos poseían un color uniforme y estaban libres de musgos.

Procesamiento

Ambas cortezas se secaron en estufa con recirculación de aire a 90 ºC durante 72 horas. La molienda se realizó en un molino de cuchillas. El polvo obtenido fue envasado en bolsas de nylon selladas hasta su utilización.

Obtención de los extractos

Todos los extractos se obtuvieron por percolación, usando como menstruo mezclas hidroalcohólicas al 20 y 83%. Para ello se emplearon 1000 mL de solvente/50g de corteza molida. El material se maceró 24 horas previo a la percolación. Durante el proceso se adicionó solvente limpio hasta obtener los volúmenes deseados.

Cepas

En la evaluación de la actividad antimicrobiana se utilizaron 2 cepas de Staphylococcus aureus: ATCC 29740 (referente) y una cepa salvaje aislada de una vaca con mastitis clínica.

Medio de cultivo

En todos los ensayos se empleó agar Mueller Hinton (15 mL en placas de 100 mm de diámetro).

Evaluación in vitro

La actividad antimicrobiana de las tinturas se estableció mediante el método de difusión sugerido por Kirby y Bauer (Bio-Merieux, 1984). Se utilizaron discos de papel de filtro Watman 3 impregnados con cada tintura. Como controles se emplearon discos impregnados en soluciones alcohólicas al 20 y 83%, respectivamente. A las dos cepas utilizadas se les determinó su sensibilidad frente a los antibióticos: cloranfenicol, ampicilina, penicilina, eritromicina, estreptomicina, gentamicina, kanamicina, tetraciclina y sulfametoxasol.

Selección de la muestra a tratar

Ante la imposibilidad de infectar animales sanos con una cepa conocida para inducir mastitis fue necesario realizar un pesquizaje, mediante el método de Schlam o California, para detectar animales con mastitis subclínica. A tal fin se seleccionó la unidad San Lorenzo de la provincia Ciego de Ávila. Se enviaron muestras de leche de los animales positivos a este ensayo al laboratorio provincial de veterinaria.

Tratamiento

A cada animal se aplicó una dosis diaria consistente en 5 mL por vía intramamaria durante el ordeño de la tarde. El tratamiento tuvo una duración máxima de 7 días. La acción terapéutica se evaluó mediante la prueba de Schlam.

Análisis estadístico

A los valores que se obtuvieron en el estudio in vitro, se les aplicó un análisis de varianza mediante el empleo del programa estadístico Sistat, en tanto que los obtenidos en el ensayo de campo se procesaron según el método de comparación de proporciones.

Valoración económica

Se realizó la valoración económica en función del costo de la tintura seleccionada para el ensayo in vivo; el costo se comparó con el debido a tratamientos convencionales para 5 días de aplicación.