Los antibióticos son sustancias químicas producidas por microorganismos vivos tales como, hongos o plantas, que tienen poder de inhibir el desarrollo o destruir bacterias y otros microorganismos en soluciones débiles.
Los antibióticos se pueden clasificar en:
- Naturales: Sintetizados directamente por microorganismos
- Semisintéticos: Son aquellos que siendo sintetizados por microorganismos, se utiliza su núcleo-estructura y se modifica por agregación de ciertos radicales químicos.
- Sintéticos: Son aquellos antibióticos sintetizados por el hombre una vez que se ha conocido su forma natural.
Cada antibiótico tiene dos formas de acción:
- Bactericidas: Entre los cuales están la penicilina, neomicina, polimixina, etc.
- Bacteriostáticos: Ej. : tetraciclinas, cloramfenicol, eritromicina, etc.
Es importante conocer también las medidas de actividad de los antibióticos, por ejemplo: La Penicilina se mide por su acción sobre la cepa H. de estafilococo o la cepa 209 y se expresa en unidades Oxford, que nos representa la cantidad de penicilina que disuelta en 1 ml. de diluyente produce un halo de inhibición de 24 mm. de diámetro.
La actividad de todos lo demás antibióticos distintos a la penicilina, se expresan en microorganismos de droga pura cristalina. Una unidad Oxford de penicilina es igual a 0,6 microorganismos de penicilina pura cristalizada.
Los antibióticos para ser estudiados, deben ser sometidos a un antibiograma, el cual consiste en un estudio "in Vitro", de la sensibilidad y susceptibilidad del microorganismo causante de la enfermedad frente a los diversos antibióticos.
Luego de realizar el antibiograma podremos ver la capacidad que tiene un antibiótico de actuar sobre un número determinado de especies y también observar la capacidad que posees ciertas bacterias de crecer y multiplicarse en presencia de un antibiótico.
Los antibiogramas se pueden realizar mediante dos métodos:
1. Método de dilución en serie (en tubo): Que es un método Cuantitativo que se realiza en tubos, mediante el cual se puede titular exactamente la sensibilidad de una cepa bacteriana a un determinado antibiótico.
2. Método de difusión del antibiótico en agar (en placa de Petri): Que es un método cualitativo, donde observamos cuan susceptible es el microorganismo al determinado antibiótico. (Será explicado con más detalles en el desarrollo del trabajo).
A continuación daremos a conocer los materiales que fueron utilizados en el laboratorio de microbiología.
Material Diverso:
- Pie de Metro
- Portaobjetos
- Tórula
- Estufa de Cultivo
- Aceite de Inmersión
- Cristal Violeta
- Lugol
- Alcohol – Acetona
- Fucsina
- Microscopio
- Placa de Petri
- Pinza de Plástico
- Antibióticos en tableta
Nuestra muestra fue obtenida de la saliva de un perro sano de 5 años de edad, de acuerdo a la muestra, procedimos a hacer el antibiograma y la tinción de gram para diagnosticar el tipo de bacteria y así completar nuestro trabajo.
a) Realización del Antibiograma:
- Procedimiento:
–Utilizamos el método de difusión del antibiótico en agar.
- Empleamos una placa de Petri con una cepa de 5 mm. de altura de medio Muller-Hinton. ( Se utiliza este medio ya que nos permite obtener resultados comparables)
- Empleamos antibióticos en tabletas a dosis conocidas
- Se sembró en forma homogénea una suspensión de microorganismos problema , en este caso utilizamos una tórula de algodón estéril, impregnada con saliva de un perro sano de 5 años de edad, extendiéndola en toda la superficie de la placa
- A continuación dejamos secar la superficie de la placa por 5 a 10 minutos.
- Sobre la superficie de la placa, colocamos los antibióticos en tableta en su respectivo lugar, (como muestra la figura 1), utilizando para ello una pinza esterilizada.
- Luego se incubó la placa por 24 horas y posteriormente se midió el diámetro de inhibición producido por cada uno de los antibióticos, mediante el pie de metro.
- Los resultados fueron los siguientes:
Antibiótico | Diámetro del halo (mm.) |
A. (AMC) | 39 mm. |
B. (EM) | 38 mm. |
C. (D) | 30 mm. |
D. (NV) | 19 mm. |
- Al analizar la tabla de datos con los diámetros de inhibición producidos por cada antibióticos, obtuvimos los siguientes resultados:
- Antibiótico A. (Amoxicilina): Presentó un diámetro de halo de 39 mm., lo que podemos concluir que el antibiótico tiene un gran poder inhibitorio hacia la bacteria, ya que la amoxicilina actúa sobre las bacterias Gram (+) y Gram (-). La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se comprueba el efecto del antibiótico sobre la bacteria.
- Antibiótico B. (Enrofloxacino): Presentó un diámetro de halo de 38 mm., a lo cual concluimos que al igual que el antibiótico A, presentó un gran poder inhibitorio hacia la bacteria, ya que el enrofloxacino actúa al igual que los antibióticos anteriores, sobre bacterias Gram (+) y Gram (-). La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se comprueba el efecto inhibitorio del antibiótico sobre la bacteria.
- Antibiótico C. (Doxiciclina): Presentó un diámetro de halo de 30 mm., a lo cual concluimos que tiene poder inhibitorio por la bacteria, pero en menor magnitud respecto a los dos antibióticos anteriores, ya que este antibiótico actúa sobre bacterias Gram (+) y bacterias Gram (-).La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se comprueba el efecto inhibitorio del antibiótico sobre la bacteria.
- Antibiótico D. (Neomicina): Presentó un diámetro de halo de 19 mm., a lo cual concluimos que tiene bajo poder inhibitorio por la bacteria ya que este antibiótico a diferencia de los tres anteriores, actúa sólo sobre bacterias Gram (-) La bacteria que utilizamos en el antibiograma, al realizarle la tinción de Gram resultó ser Gram (+), con esto se comprueba el bajo efecto inhibitorio del antibiótico sobre la bacteria.
b) Realización de la tinción de Gram:
- Procedimiento:
– Se hizo un frotis con la muestra obtenida por nosotros y se fijó a la llama
– Se cubrió la superficie del frotis con cristal violeta durante 2 minutos
– Se botó el exceso de colorante y se cubrió con lugol durante 1 minuto
– Se decoloró el frotis con alcohol – acetona rápidamente
– Se lavó con agua y se dejó escurrir
– Se tiñó con fucsina durante 10 segundos
– Se lavó con agua
– Se secó el frotis y se examinó en el microscopio
Los resultados observados en el microscopio nos llevaron a los siguientes resultados:
- Se encontraron bacterias Gram (+), ya que presentaron coloración Violeta.
- Con la ayuda de la Dra. Maier identificamos que nuestra muestra contenía una gran cantidad de bacterias del género Corynebacterium.
La importancia que tiene conocer los antibiogramas como futuros Médicos Veterinarios es realmente importante, ya que con este simple método podemos hacer un diagnóstico más certero frente a los distintos cuadros que puedan presentar nuestros pacientes. Además de realizar el antibiograma, también realizamos como complemento la tinción de gram para poder diagnosticar de manera correcta el tipo de bacteria que contenía nuestra tórula. De acuerdo a los resultados vemos que en general los halos de inhibición fueron bastante grandes lo que quiere decir que nuestra bacteria (Corynebacterium) es muy sensible a los diversos antibióticos usados en este trabajo, excepto el antibiótico neomicina el cual presentó un halo de inhibición más pequeño que los anteriores debido a que el espectro que abarca la neomicina son Gram (-), y nuestra bacteria era Gram (+), fundamentalmente se explica por eso.
Marianela Abeleida
Roberto Astudillo Cancino
Escuela de Medicina Veterinaria
Unidad de Microbiología