Estudio enzimático y anatomopatológico de ponedoras alimentadas con semilla de Lupinus albus (dulce y amarga) durante 22 semanas (página 2)

MATERIAL Y METODOS

Se utilizaron 160 gallinas White Leghorn, línea Shaver Starcross 288 (Shaver, 1993), de 34 semanas de edad al inicio de la experiencia. Las aves fueron mantenidas en jaulas individuales, administrándoles 112.5 g de alimento/día/ave y agua a voluntad por 22 semanas. Durante todo el tiempo experimental se llevó control de luz, mediante reloj-control hasta completar 15 h/luz/día, cantidad de horas luz utilizada hasta el término de la experiencia.

Se trabajó con semilla de Lupinus albus variedad Multolupa tanto dulce como amarga, con un 10% de inclusión en las raciones, las cuales se componían de una dieta basal (maíz, afrechillo de trigo, harina de pescado, ácidos grasos, con-chuela, fosfato, metionina, vitaminas, minerales y sal). Las semillas dulce y amarga contenían 0.043% y 2.63%, respectivamente, de alcaloides totales, expresados como lupanina.

Se utilizaron 4 grupos de 40 aves cada uno, dependiendo de los niveles de inclusión de alcaloides en la ración:

Grupo A: Ración dulce (0.0105 g% de alcaloi-des).

Grupo B:  Ración semidulce (0.0421 g% de al-ca-loi-des).

Grupo C:  Ración semiamarga (0.106 g% de al-caloides).

Grupo D:  Ración amarga (0.148 g% de alcaloi-des).

VARIABLES ESTUDIADAS

1. Estudio enzimático: se midieron las enzimas Aspartato-aminotransferasa (AST) (EC1 2.6.1.1.), Alanino-aminotransferasa (ALT) (EC1 2.6.1.2.) y Fofatasa alcalina (FA) (EC1 3.1.3.1.). Se realizaron cinco muestreos a las semanas 4, 8, 12, 16 y 22 del período experimental, obteniéndose en cada muestreo sangre entera vía punción de la vena alar, al 10% de las aves de cada grupo.

2. Estudios macro y microscópico: se realizaron estudios anatomopatológicos e histopatoló-gicos del 5% de las aves al inicio de la experiencia (grupo control inicial) y del 20% de cada grupo al finalizar el estudio. El sacrificio de las aves se hizo por insensibilización a nivel de la articulación occipitoatlantoidea, con posterior sección de la vena yugular, obteniéndose muestras de hígado, riñón y cerebro, realizándose in situ el estudio macroscópico. Para el análisis microscópico se extrajeron muestras de dichos órganos y se fijaron en formalina tamponada al 10%; con posterioridad se procesaron en autotécnico y se incluyeron en parafina para ser cortadas a 5 micras de espesor y teñidas sólo con hematoxilina-eosina (Armed Forces Institute of Pathology, 1968). Para determinar la degeneración grasa se cuantificó indirectamente la presencia de vacuolas intracitoplasmáticas (degeneración vacuolar) por simple observación microscópica.

En el cuadro 1 se detallan las aves por grupo y muestreo para los estudios enzimáticos, macro y microscópicos.

3. Estudio de mortalidad: se llevó registro de mortalidad.

ANALISIS DE LABORATORIO

La actividad enzimática se determinó mediante método cinético UV a 30° C según IFCC y DGKC. Se utilizaron kits enzimáticos Boehrin-ger-Mannheim (AST: Nº 1.442.708; ALT: Nº 487.368 y FA: Nº 1.442.236), empleando un fotómetro Hitachi 4020.

Los niveles de alcaloides, tanto en la semilla como en las raciones, se determinaron con el mé-todo de cromatografía en capa fina, en el Depto. de Análisis Instrumental de la Fac. de Quí-mi-ca y Farmacia de la Universidad de Concepción.

Análisis estadístico: se practicó la prueba de X2 (ji cuadrado) de homogeneidad entre los grupos con un nivel de significación del 5% en el análisis de los trastornos macro y microscópicos al final de la experiencia y un análisis de varianza de dos vías para el estudio enzimático, empleándose el programa computacional Microstat versión 4.0 de 1984.

RESULTADOS

1. ESTUDIO ENZIMATICO

Aspartato-aminotransferasa: en la actividad de esta enzima no se encontraron diferencias significativas (p > 0.05) entre los 4 grupos como tampoco entre los muestreos realizados (cuadro 2).

Alanino-aminotransferasa: esta enzima evidenció diferencias significativas (p < 0.05) entre los grupos en estudio en el tercer muestreo y entre los muestreos realizados (cuadro 3).

Fosfatasa alcalina: la actividad observada en esta enzima evidenció diferencias significativas (p < 0.05) entre los distintos muestreos, no apreciándose diferencias entre los grupos alimenticios (cuadro 4).

2. ESTUDIOS MACRO Y MICROSCOPICOS

Análisis macroscópico: el examen macroscópi-co de hígado, cerebro y riñón al inicio de la experiencia no reveló lesiones. Sin embargo, al término de ésta en el hígado se observó el parénquima de textura friable en los 4 grupos analizados, evidenciándose de coloración amarillo-pálida con bordes redondeados y tumefactos, características que indicaban degeneración grasa, y además se evidenció congestión (cuadro 5), no encontrándose diferencias significativas (p > 0.05) entre los grupos. Por otra parte los riñones presentaron focos hemorrágicos en los grupos C y D y congestión en la totalidad de ellos, no observándose diferencias significativas (p > 0.05) entre los grupos (cuadro 6). En relación al cerebro, éste sólo evidenció edema en todos los grupos en estudio al final de la experiencia.