Especificidad de la técnica HPLC para la evaluación de la estabilidad química del sólido pulverulento de Parthenium hysterophorus, Linn, en base a partenina

1. Resumen
2. Especificidad de la técnica analítica mediante Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC) para la estabilidad
3. Preparación de las disoluciones de las muestras degradadas
5. Estabilidad acelerada y de vida estante
6. Especificidad de la técnica analítica HPLC para estabilidad
7. Cromatografía en capa delgada cualitativa (CCD)
8. Espectrofotometría ultravioleta directa

Resumen

En el Departamento de Farmacia de la UCLV se desarrollan investigaciones analíticas con el sólido pulverulento de la planta Parthenium hysterophorus, Linn encaminadas a la obtención de una forma farmacéutica de utilidad antiparasitaria científicamente fundamentada, acorde a las exigencias de normativas establecidas por el Centro Estatal de Control de Calidad de los Medicamentos (CECMED) y en Farmacopeas internacionales, que garanticen de esta forma los requisitos de calidad, seguridad y eficacia exigidos al efecto.

Como requisito indispensable para desarrollar los estudios de estabilidad del polvo de la planta y de futuras formas de dosificación se requiere evaluar la especificidad de la técnica de análisis cuantitativo propuesta para desarrollar el estudio. Se demuestra en la investigación que la Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC) para la cuantificación de partenina en el sólido pulverulento del Parthenium hysterophorus, Linn, es específica bajo las condiciones de trabajo establecidas y puede emplearse en los estudios de estabilidad.

Palabras claves: Parthenium hysterophorus, partenina, HPLC, especificidad, estabilidad.

Especificidad de la técnica analítica mediante Cromatografía Líquida de Alta Eficacia (HPLC) para la estabilidad

Preparación de la disolución patrón (150 mg/L)

Se pesó con exactitud 1,000 mg del patrón partenina, aislada según se describe en el epígrafe 2.2, se enrasó con metanol en un matraz aforado de 2 mL, se tomó una alícuota de 600 µL y se enrasó con fase móvil acetonitrilo-agua (40:60) en un matraz aforado de 2 mL.

Preparación de la disolución de la muestra a tiempo cero

Se pesaron 0,1g de material vegetal y se colocaron en un erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un baño ultrasónico, durante 10 minutos. Se filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se repitió una vez más la extracción. Se reunieron los filtrados, se concentró a vacío y se redisolvió en 4mL de metanol. Se tomó una alícuota de 1mL y se enrasó a 10 mL con fase móvil acetonitrilo-agua (40:60) en un matraz aforado.

Preparación de las disoluciones de las muestras degradadas

▲ Medio oxidante: Se pesó 0,1 g de material vegetal, y se colocó en un erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un baño ultrasónico durante 10 minutos. Se filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se repitió la extracción. Se reunieron los filtrados y se la adicionaron 10 mL de peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3 %, se reflujó durante 1 hora, se tapó y se protegió de la luz por 2 días, se concentró a vacío, luego se redisolvió en 4 mL de metanol, se ajustó el pH entre 7 y 8, se tomó 1 mL y se enrasó a 10 mL con fase móvil (Acetonitrilo-Agua) (40:60) en un matraz aforado.

▲ Medio ácido y básico: Se pesó 0,1g de material vegetal, y se colocó en erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un baño ultrasónico durante 10 minutos. Se filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se repitió la extracción. Se reunieron los filtrados, se adicionó 10 mL de (HCl 1N, NaOH 1 N), se reflujó durante 1 hora, se concentró a vacío, luego se redisolvió en 4mL de metanol, se ajustó el pH entre 7 y 8, se pipeteó 1mL y se enrasó a 10 mL con fase móvil (Acetonitrilo-Agua) (40:60) en un matraz aforado.Se realizó la inyección de las muestras, previamente filtradas por filtro miliporo de 0,45 µm y se inyectaron en el instrumento 10 µL de cada una, bajo las condiciones cromatográficas anteriormente.

• Cromatografía en capa delgada cualitativa (CCD)

Se realizó un seguimiento cualitativo mediante la Cromatografía en Capa Delgada a las muestras sometidas, a las diferentes condiciones degradativas (estrés) epígrafe 2.6.1., en comparación con el comportamiento cromatográfico de la disolución de referencia. Se aplicaron 20 m L de cada variante analizada, y del patrón de referencia y se emplearon las condiciones cromatograficas descritas en el anteriormente Se calculó la razón de flujo (Rf) de las manchas obtenidas en los cromatogramas en comparación con la disolución de referencia.

• Espectrofotometría ultravioleta

Muestra inicial a tiempo cero.

Se pesó con exactitud 250 mg de material vegetal y se realizó una extracción con 10 mL de metanol, agitando en máquina sacudidora durante 10 minutos y se filtró. Se tomó 20 µL de la solución anterior y se enrasó a un volumen de 2 mL con metanol en matraz aforado. Se efectuó un barrido de exploración en el intervalo de 200-300 nm. Se realizaron las mediciones utilizando metanol como referencia.

Muestras degradadas (medio ácidos, básicos y oxidantes).

Las muestras de ensayo concentradas a sequedad se redisolvieron en metanol, se enrasaron en matraces aforados de 2 mL. Se obtuvo la absorbancia en el intervalo de 200 a 300 nm, empleando como blanco el metanol.