Actividad de Fosfatasa Ácida en Tejidos de Camundongos Inmunes de Gérmenes y Convencionales (página 2)

Existen relatos sobre la asociación de esta enzima en el mecanismo de defensa y de la poca actividad en el intestino de los animales GF cuando se compara con los animales convencionales (CV)28, 29 . Debido a que los animales GF han mostrado tener un metabolismo diferente de aquellos observados en los similares CV la investigación comparativa con los animales GF y CV, es importante pues permite mostrar la influencia y las funciones de la flora microbiana sobre los diversos sistemas del cuerpo.

Considerando que algunos tejidos animales, como el riñón y el hígado de los ratos CV son utilizados como control positivo para la reacción histoquímica de la fosfatasa ácida, este trabajo tiene como objetivos: verificar a través de la comparación entre los animales GF y CV, la influencia de la flora microbiana sobre la actividad de esta enzima en el músculo masetero, lengua, riñón y hígado y determinar la posible utilización de este tejido como control positivo de coloración para esta fosfatasa.

4. Material Y Métodos

Animales: fueron seleccionados 10 (diez) camundongos inmunes de gérmenes (GF) y 10 (diez) camundongos convencionales (CV) Swiss NAE machos y hembras, con 45 días de edad. Estos animales fueron sometidos a anestesia por inhalación de éter y muerte y de ellos fueron removidos el hígado, el riñón, el masetero y la lengua.

Actividad de fosfatasa ácida: los tejidos a ser estudiados fueron inmersos en solución salina tamponada (PBS- 0,01M- pH 7,3) a 4ºC, en seguida fueron condicionados en papel aluminio y guardados en congelador a –82ºC (Congelador Queue – England) hasta el momento de su uso. Los cortes fueron hechos en criostato (Cryostar- England) a –22ºC, con 6 micras de espesura. Análisis de las muestras fueron hechas después de realizada la coloración por hematoxilina y eosina (HE) y por el método histoquimico en duplicata. La técnica de los metales pesados9 fue utilizada para el estudio de la actividad de fosfatasa ácida. Después del periodo de incubación, fueron contra-teñidos con hematoxilina de Mayer y montadas las láminas con gel de glicerina.

La presencia de la actividad fosfatasa ácida fue observada considerando la intensidad de las reacciones: fuertemente positiva (marrón oscuro a negro), levemente positiva (marrón claro), y sin reacción, tanto en el epitelio como en el conjuntivo de los fragmentos observados. Las láminas teñidas por la HE sirvieron para orientar las estructuras de los tejidos.

5. Resultados

En la Tabla No 1 están presentados los valores de FAc encontrados en los tejidos de ratos GF y CV. Se observa en esta tabla que la FAc se presenta en mayor cantidad en todos los tejidos de animales CV. Por otro lado, las células tubulares renales presentaron reacción fuertemente positiva en todos los grupos de animales testados. En los animales GF la FAc estaba ausente en las células de Kupffer (K), en el hígado, en las fibras musculares del masetero y en todos los tejidos de la lengua con excepción de la camada basal del epitelio (CBE). Además en los animales GF la enzima se mostró levemente positiva en el espacio periportal del hígado. La enzima no fue detectada en la camada de queratina de la lengua tanto en los animales GF como en los CV.

6. Discusión

Desde la publicación de los trabajos de Gomori9 , los métodos originales o modificados para evidenciar fosfatasas fueron usados con éxito por diversos investigadores 12, 13, 30, 31. En lo que se refiere a los animales CV, nuestros resultados fueron similares a los trabajos relatados por Wachstein & Meisel 10 y Thorbeck et al.11. Las células tubulares renales de los animales GF y CV presentaron reacción positiva. El hígado y el riñón son órganos en los cuales ocurre metabolismo elevado relacionado, respectivamente, con el proceso y excreción de la dieta. Esto explica, en parte, la actividad fuertemente positiva de las células de estos órganos para fosfatasa ácida. En el hígado existen las células de Kupffer responsables por la fagocitosis y por lo tanto, son células donde se encuentra un número elevado de lisosomas 11, 17. La reacción que existe entre fosfatasa ácida, pinocitosis y fagocitosis, explica la presencia de esta enzima en células hepáticas y renales donde existen células especializadas en el procesamiento de gotas de lípidos y catabolitos, respectivamente 32.

La actividad de fosfatasa ácida en el masetero y en la lengua de los camundongos GF no fue encontrada en la literatura consultada. El masetero y la lengua están relacionados con elevado metabolismo energético. La lengua está en constante contacto con la microbiota bucal, además de abrigar diversos tipos de microorganismos entre los surcos y papilas. La presencia fuertemente positiva de esta enzima en todas las capas e fases del epitelio de la lengua de los animales CV, sugiere un mayor estímulo de la queratinización por la microbiota bucal, pues en los animales GF la actividad enzimática fue observada levemente positiva solamente en las células basales del epitelio. Este factor llama la atención por el hecho de que la participación de la fosfatasa ácida en la queratinización puede no ser un fenómeno aislado para la presencia de la microbiota oral. La microbiota oral, probablemente, estimula la queratinización como respuesta protectora para el tejido. No obstante, importantes son las variaciones que existen en las reacciones histoquímicas dependiendo de las especies animales estudiadas12 . También hay que tomar en cuenta que la actividad enzimática puede ser suprimida o elevada dependiendo de los tipos de microorganismos asociados a la mucosa del intestino de camundongos 29, 33.

Por otro lado, la actividad de la fosfatasa ácida estuvo ausente en las fibras musculares del masetero y de la lengua de los animales GF, mientras que fue fuertemente positiva en las mismas estructuras de los animales CV. La ubicuidad de esta enzima en los tejidos de animales CV puede reforzar la participación de los microorganismos en la activación de la reacción enzimática.

Concluyendo, nuestros resultados sugieren que la queratinización y actividad de la fosfatasa ácida en los tejidos de los animales GF y CV estudiados, están relacionados con la presencia de la flora microbiana. Desde el punto de vista práctico, el riñón y no el hígado, de los camundongos Swiss NAE inmunes de gérmenes, sirve como control positivo para la tinción histoquímica de la actividad de fosfatasa ácida.

Tabla no 1.

Actividad de fosfatasa ácida en tejidos de la cavidad bucal de camundongos convencionales y sin gérmenes.

Legenda: K= Células de Kupffer; EP= Espacio Periportal; TR= Células Tubulares renales; FM= Fibras Musculares; E= Epitélio; C= Conjuntivo; CE= Ceratina; CBE= Camada Basal del Epitélio;

+++ (fuertemente positiva), + (levemente positiva), – (sin reacción).

7. Agradecimientos

El Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq – Brasil); Fundação de Assessoramento à Pesquisa de Minas Gerais (FAPEMIG-Brasil), al Prof. Enio Cardcilio Vieira, Prof. Jacques Robert Nicoli, a la Prof. Jaqueline Alvarez Leite (Instituto de Ciências Biológicas – UFMG), y al Prof. Alfredo José Barbosa (Faculdade de Medicina-UFMG).

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Daniel Penna e Souza1, Flávio Juliano Garcia Santos Pimenta2, Maria Esperanza Cortés3, Vagner Rodrigues Santos4 – fundacta[arroba]actaodontologica.com

Estudiante de graduación de la Facultad de Odontología de la Universidad Federal de Minas Gerais Estudiante de Graduación1, Estudiante de graduación de la Facultad de Odontología de la Universidad Federal de Minas Gerais2, Profesora Adjunta – PhD – Departamento de Odontología Restauradora de la Universidad Federal de Minas Gerais3, Profesor Adjunto – DDS-PhD – Departamento de Clínica, Patología y Cirugía de la Universidad Federal de Minas Gerais4. Laboratório de Microbiologia- Facultad de Odontologia Universidad Federal de Minas Gerais – Belo Horizonte- Brasil. Publicación original: Acta odontol. venez, dic. 2002, vol.40, no.3, p.272-275. ISSN 0001-6365. Reproducción autorizada