Inmunogenicidad diferencial de dominios de las glicoproteínas de la envoltura del HTLV-I

• Materiales y métodos
• Discusión
• Referencias

RESUMEN: Mediante inmunoblot se evaluó la reactividad de las glicoproteínas en diferentes regiones de la envoltura viral de anticuerpos presentes en el suero de individuos seropositivos para HTLV-I provenientes del municipio de Tumaco. Se determinó que la porción carboxilo-terminal de la gp-46 es la más inmunodominante (aminoácidos 166-308), pues presentó cifras variables de reactividad de 80% a 100%. Esta región podría ser una candidata potencial para desarrollar una vacuna con espectro amplio a nivel mundial. Además, la región comprendida entre los aminoácidos 166-201 de la gp-46 del HTLV-I se reconoció en 100% de los sueros provenientes de individuos con PET/ HAM (paraparesia espástica tropical/mielopatía asociada con la infección por HTLV-I ) y sólo en 80% de portadores sanos (p = 0.004), diferencia que es estadísticamente significativa. Este resultado permitió proponer que durante la progresión de la enfermedad se presentarían cambios funcionales en determinadas porciones de la proteína de superficie de la envoltura, que de algún modo modula la respuesta inmune humoral del individuo seropositivo para HTLV-I.

Palabras claves: Glicoproteínas. HTLV-I. Retrovirus. Infección viral.

SUMMARY: By Western Blot, the reactivity of seropositive individuals from the town of Tumaco, against different regions of the viral envelope glycoproteins was evaluated. It was determined that the carboxyl end of the gp-46 (amino acids 166 to 308) had the maximum immuno-response with a ratio of reactivity ranging from 80% to 100%. This region represents a potential for developing a broad spectrum vaccine. Furthermore the region between aminoacids 166-201 of the gp-46 of HTLV-I revealed a compatible reaction with sera from 100% of individuals with TSP/HAM (tropical spastic paraparesis/HTLV-I associated myelopathy), in contrast, only 80% of sera from asymptomatic individuals yielding a positive reaction, (p = 0.004) was observed. Based on these results, it is proposed that during the progress of a viral infection, functional changes in defined regions of the envelope glycoprotein would modulate the immuno-response in HTLV-I seropositive individuals.

El virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I), es un retrovirus del grupo HTLV-BLV perteneciente a la familia Retroviridae1. Es el agente etiológico de la leucemia/linfoma de las células T del adulto (ATL)2 y de la mielopatía asociadas con el HTLV-I (MAH)/paraparesia espástica tropical (PET)3,4. Como algunas otras infecciones de tipo viral, el HTLV-I se transmite por las vías perinatal, sexual o sanguínea. Sin embargo, la historia natural de la infección no se entiende muy bien. La epidemiología de la infección en sí misma es altamente rara, pues está marcada por la restricción geográfica y un alto grado de microepidemicidad5.

En Colombia los primeros casos de PET los informaron Zaninovic et al.6 y Arango et al.7 publicaron su asociación con el HTLV-I poco después del informe de Gessain et al.3 El foco de mayor endemia en Colombia se encuentra en Tumaco, donde la prevalencia alcanza 0.098%8; sin embargo ha sido posible identificar focos aislados en toda la Costa del Pacífico, donde el virus infecta individuos de otras etnias9. Las glicoproteínas de la envoltura de retrovirus tanto de humanos como de animales, son esenciales en los estadíos iniciales de la infección viral. Potencialmente son las proteínas más inmunogénicas de todos los antígenos virales10.

El gen ENV del HTLV-I codifica por una glicoproteína de 62 Kd (gp62), que es la precursora de una glicoproteína de superficie de 46 Kd (gp46) y una transmembranal de 21 Kd (gp21)11. Se ha podido demostrar que son los antígenos virales predominantes, los que estimulan la producción de anticuerpos en los individuos infectados con HTLV-I10.

Otra línea de evidencia sugiere que los anticuerpos dirigidos contra estas proteínas pueden neutralizar in vitro la formación de sincicios inducida por HTLV-I12, además de neutralizar la infectividad de un pseudotipo del virus de la estomatitis vesicular que presenta las glicoproteínas de la envoltura viral13.

Mediante el empleo de proteínas producidas en sistemas bacterianos (proteínas recombinantes)14-16 y péptidos sintéticos17-19 que cubren diferentes regiones de las glicoproteínas de la envoltura viral, se ha podido establecer que la región más inmunoreactiva es la mitad carboxilo-terminal; se ha demostrado también que esta región se puede utilizar para discriminar la infección de HTLV-I de la del HTLV-II.

MATERIALES Y MÉTODOS

Para comparar la reactividad de anticuerpos a diferentes regiones de la gp62, se ensayaron 5 tipos de proteínas recombinantes (PR) mediante la técnica de Western Blot. La Figura 1 muestra las diversas características de estas proteínas. La técnica sigue básicamente los protocolos descritos en Towbin et al.20 y Harlow y Lane21. Las tiras de nitrato de celulosa se incubaron en solución de bloqueo (albúmina sérica bovina al 3% en PBS) durante 1 hora a 3º C. Luego se hicieron 3 lavados de 5 minutos cada uno con amortiguador de lavado (PBS pH 7.2, Tween 20 0.2%); cada tira se incubó con el suero del correspondiente individuo obtenido de la población de estudio, en dilución 1:500 y se incubó durante una hora a 37º C con agitación constante; se repitieron los pasos de lavados antes de adicionar la anti-IgG humana biotinilada dilución 1:500 y se incubaron una hora a 37º C en agitación constante. Luego, se adicionó el complejo estreptavidina-peroxidasa de rábano en dilución 1:500 y se incubó por una hora más a 37º C con agitación constante. Por último, las tiras se revelaron con el sustrato 3,3' diaminobencidina (DAB) tetraclorhidrato al 50% y 50 µl de H2O2 y la reacción se dejó proceder hasta la aparición de las bandas. Se empleó la prueba de Fisher exacta para valorar las diferencias de reactividad a cada proteína dentro de la población en estudio.