Angiogénesis en lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal (página 2)

Materiales y métodos

Las biopsias de (n=23) pacientes, con diagnóstico de displasia leve (DL, n=5), moderada (DM, n=6), severa (DS, n=6) y carcinomas espinocelulares (CA, n=6), fueron obtenidas del Archivo del Laboratorio de Histopatología "Pedro Tinoco" de la Facultad de Odontología de la Universidad Central de Venezuela. En ningún caso los pacientes recibieron tratamiento previo, ni se confirmó la presencia de metástasis. Las características clínicas e histopatológicas y la distribución de las biopsias se muestran en la Tabla 1.

Tabla N° 1. Características clínicas-histopatológicas de las lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal

RA: reborde alveolar; PA: paladar; CA: carrillo.

Las secciones de 4 mm de grosor correspondientes a las distintas lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal se procesaron mediante la técnica modificada de la inmunoperoxidasa indirecta15 descrita previamente por Tonino y col.14. Brevemente, las secciones fueron desparafinadas y rehidratadas. Posterior al bloqueo de la peroxidasa endógena se realizaron las incubaciones con la soluciones del kit LSAB universal (labelled streptavidin biotin preoxidase) de tres componentes (Dako CA, USA). Para la determinación de la DV se utilizó el anticuerpo policlonal de humano anti-Factor VIII/ vWF (Dako, CA, USA) en una dilución 1:200 en tampón fosfato salino, pH 7,4. La inmunoreacción se detectó con el cromógeno 3-amino-9-etil carbazol (Sigma). El contrate y el montaje se realizó con hematoxilina de Meyer y gelatina glicerinada, respectivamente.

Determinación de la Densidad Vascular.

La DV se determinó de acuerdo al método de Weidner16 descrito previamente por Tonino y col.14. En las secciones las áreas de mayor DV fueron observadas a una magnificación de 100X. La cuantificación de los vasos sanguíneos y de células positivas al anticuerpo anti-Factor VIII/ vWF se realizó en cinco campos de 250X de aumento (área de 0.639 mm2). Los valores se expresaron como la media ± la desviación estándar del número de vasos sanguíneos por mm2.

Análisis Estadístico.

La DV fue comparada entre los distintos grupos de lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal mediante la prueba no-paramétrica de Mann-Whitney con un nivel de significancia de p=0,05.

Resultados

En los distintos grupos de lesiones estudiadas se observó un incremento en la DV. La DV fue menor en el grupo DL (12.70 ± 3.04), con un progresivo aumento en el grupo de DM (21.62 ± 1.99), y más significativo aún en el grupo de DS (59.50 ± 8.73) y CA (60.62 ± 8.74), Tabla 2. La expresión del FVIII/vWF en las DL y DM se observó en los vasos sanguíneos (Figs. 1 y 2), en tanto que en las DS y los CA la expresión de FVIII/vWF se observó no sólo en los vasos sanguíneos, sino también en las células aisladas o grupos de células con apariencia de brotes vasculares (Figs. 3 y 4).

Fig. 1. Expresión del FVIII/vWF en un vaso sanguíneo de una lesión de displasia leve. Barra= 10 mm.

Fig. 2. Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos de una lesión de displasia moderada. Barra= 10 mm.

Fig. 3. Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos y brotes vasculares (flechas) de una lesión de displasia severa. Barra= 10 mm.

Fig. 4. Expresión del FVIII/vWF en los vasos sanguíneos de un carcinoma espinocelular. Barra= 10 mm.

Tabla N° 2 . Densidad vascular en las lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal

La prueba no-paramétrica de Mann-Whitney reveló que existe diferencia estadísticamente significativa en la DV entre las DL y las DS (p=0.004) y las DL y los CA (p=0.004), así como también se observaron diferencias estadísticamente significativas en la DV entre las DM y las DS (p=0.002) y entre las DM y los CA (p=0.004). Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas en la DV entre las DL y las DM (p=0.052) ni entre las DS y los CA (p=0.699).

Discusión

Las propiedades angiogénicas se han descrito en una variedad de condiciones premalignas a nivel de los tejidos que incluyen, la laringe, la vejiga, las mamas, el páncreas y el tracto gastrointestinal. 6, 17, 18, 19,20 Se ha sugerido que la angiogénesis resulta de las alteraciones en el balance entre los factores estimuladores, que incluyen al factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento fibroblástico (FGF), la angiogenina, el factor de necrosis tumoral (TNF-a) entre los más relevantes y los factores inhibidores como angiostatina, talidomida, endostatina y otros21 presentes en el microambiente local del tumor. Adicionalmente a los cambios en la microvasculatura, se ha sugerido que las alteraciones en la expresión de factores reguladores de proliferación celular y apoptosis generan efectos acumulativos que podrían determinar el potencial de crecimiento y el desarrollo tumoral.22 En las lesiones premalignas y malignas de la mucosa bucal se encontró un incremento en la DV con el grado de displasia hasta el de carcinoma, similar a lo descrito en otros estudios7,8,11,13 que establecen una asociación entre el incremento de la vascularización y el proceso de angiogénesis en apoyo a la actividad proliferativa y de transformación de las células de la mucosa.

Las diferencias en la DV entre las lesiones de DL y DS, DL y CA, DM y DS y DM y CA sugieren un aumento significativo con la progresión de la displasia moderada a la severa, en tanto que la DV en esta última es similar a la observada en los CA. Nuestros resultados indican que el aumento de la vascularización, como una medida de la respuesta angiogénica, posiblemente constituye un evento temprano en el desarrollo de la carcinogénesis bucal.

Agradecimientos

Licenciado José Torres, por su colaboración en el análisis estadístico

Este trabajo fue financiado por el C.D.C.H. de la UCV (N|° 03.159.2001).

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Floribel Cedeño*; Paola Tonino**

*Profesor Asistente. Cátedra de Histología, Facultad de Odontología, Universidad Central de Venezuela. ** Profesor Asistente. Centro de Microscopía Electrónica, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela.