Inducción del proceso Embriogénico en henequén.

Introducción

El henequén es una planta textil de primer orden. El principal producto extraído de sus hojas, y el de mayor utilidad en la industria textil, son sus fibras. No obstante, la cantidad de subproductos que de él se obtienen permite que pueda ser aprovechado integralmente, lo que lo convierte en una planta muy útil.

Entre sus múltiples bondades se encuentran su capacidad fitorremediadora, su uso como abono orgánico, para la producción de biogás, su utilidad como alimento para rumiantes como dieta basal en situaciones de escasez de pastos y su empleo como cerca viva.

Por otra parte este cultivo ofrece un gran potencial de uso en zonas donde los suelos son infértiles y es limitado el desarrollo agrícola, pues se trata de una especie que prospera donde otras plantas son incapaces de sobrevivir, por tanto, no compite con los cultivos utilizados para la alimentación humana y animal.

A pesar de esto su cultivo está marginado y la falta de material de propagación ha conllevado al uso de todo tipo de material, lo cual trae como consecuencia plantaciones no uniformes, que han contribuido al deterioro gradual de las mismas. Esta situación determina la necesidad de producir material de propagación de alta calidad que por la vía tradicional es imposible resolver en un periodo corto de tiempo. El desarrollo de una metodología eficiente de propagación vegetativa como la embriogénesis somática se convertiría en una poderosa herramienta para obtener volúmenes de producción superiores en un menor período de tiempo.

Palabras clave: henequén; 2,4-D; Picloram; embriogénesis.

Materiales y métodos

Esta investigación se desarrolló en el Centro de Estudios Biotecnológicos de la Universidad de Matanzas "Camilo Cienfuegos".

• 1. Técnicas y procedimientos generales

Se utilizó el medio de cultivo MS (Murashige y Skoog, 1962) con las modificaciones propuestas por Robert et al., (1992), suplementado con sacarosa (3% p/v) y myo-inositol (100 mg/L-1). Se emplearon frascos de vidrio de 250 ml con 25 ml de medio de cultivo. La esterilización de los medios de cultivo se realizó en autoclave a una temperatura de 121° C y 1,2 kg/cm2 de presión durante 20 minutos. La solidificación se hizo con Agar Técnico # 3 (BIOCEN). El pH se ajustó a 5.7 con HCl (0,1 N) previo a su esterilización. Los cultivos se incubaron en cámaras de luz solar con una iluminación aproximada de 3000 lux (37,5 mol/m-2/s-1) y fotoperíodo de 16 horas luz. La temperatura osciló entre los 25 y 28°C.

• 2. Selección del material vegetal

Para este trabajo se utilizaron plantas de henequén de la variedad Sac Ki o henequén blanco crecidas en condiciones de plantación comercial.

Para realizar la desinfección superficial los explantes se colocaron en una disolución de hipoclorito de sodio al 5%, durante 20 minutos, posteriormente se realizaron 3 enjuagues con agua destilada estéril y a continuación se eliminaron las partes dañadas por el cloro. A partir de este momento el tejido se condujo al flujo laminar y se sometió a una segunda desinfección, para ello el material vegetal se colocó en una disolución de hipoclorito de sodio al 5%, durante 10 minutos; posteriormente se realizaron 3 enjuagues con agua destilada estéril y se eliminaron los fragmentos dañados por el cloro. Una vez concluida la desinfección los explantes se sembraron en el medio propuesto para el establecimiento.

• 3. Evaluación de la respuesta morfogénica de explantes de henequén sembrados en altas concentraciones de auxinas

Explantes correspondientes a hojas inmaduras cultivadas in vitro en medios de establecimiento según Garriga et al., (2006) se seleccionaron y se plantaron en medio de inducción de callo: 0; 2,5; 5 y 10 mg/L de 2,4-D y Picloram. Todas las concentraciones de auxinas se combinaron con 2,0 mg/L de BAP. El tamaño corresponde a ocho frascos con tres explantes cada uno. Se evaluaron en todos los explantes, a los 30 días de realizada la explantación, el porcentaje de formación de callo primario y el porcentaje de callo con estructuras embriogénicas.

• 4. Evaluación de indicadores del crecimiento en callos de henequén inducidos con altas concentraciones de auxinas

A los 30 días de realizada la explantación se procedió a la evaluación de la producción de masa seca. Esta variable se determinó después de secar el callo en estufa a 70oC hasta obtener un peso constante. Para ello se emplearon 5 explantes por tratamiento.