Micropropagación de eucalipto (Eucalyptus grandis hill ex maiden) en el sistema de inmersión temporal
Enviado por Dagoberto Castro R.
ABSTRACT: A new procedure is described for in vitro multiplication using the temporary immersion system for plants (Eucalyptus grandis Hill ex Maiden) coming from elite trees. The optimum multiplication frequency was established at every 12 h with a duration of 3 min. The additional application of a stream of fresh air every 6 h for 3 min diminished the hyper-hydration of the plants during the process. The procedure involved two steps: shooting and elongation of buds. The best treatment for induction of axillary buds was obtained in the culture medium MS (Murashige and Skoog) with the nitrates reduced to half strength plus 0.5 benciladenin (BA) mg L-1, with volumes of 55.5 mL per group of buds for three weeks. The elongation took place in the MS culture medium plus indol butiric acid (IBA) 1.0 g L-1 for three weeks. The use of this protocol allows producing an average of 260 competent plants of E. grandis. Shoots taller than 2 cm were positively related with higher survival during the acclimatization phase.
Key words: Eucalyptus grandis, temporary immersion, micropropagation.
RESUMEN: Se describe un nuevo procedimiento para la multiplicación in vitro mediante el sistema de inmersión temporal de plantas de eucalipto (Eucalyptus grandis Hill ex Maiden) procedentes de árboles elite. La mayor eficiencia de multiplicación se estableció a una frecuencia óptima de inmersión cada 12 h con una duración de 3 min. La aplicación adicional de un flujo de aire fresco cada 6 h durante 3 min disminuyó la hiperhidratación de las plantas durante el proceso. Este procedimiento comprendió dos pasos: la brotación o multiplicación múltiple y la elongación de brotes. El mejor tratamiento para la inducción de brotes axilares o multiplicación se obtuvo en un medio de cultivo MS con los nitratos reducidos a la mitad + 0,5 mg L-1 de benciladenina (BA), con volúmenes de 55,5 mL por grupo de brotes durante tres semanas. La elongación tuvo lugar en el medio de cultivo de Murashige y Skoog (MS) más ácido indolbutírico (AIB) 1,0 g L-1, durante tres semanas. La utilización de este protocolo permitió obtener un promedio de 260 plantas competentes de E. grandis. Las plantas con tamaño mayor a 2 cm se relacionaron positivamente con una mayor supervivencia durante la fase de aclimatización.
Palabras claves: Eucalyptus grandis, inmersión temporal, micropropagación.
Introducción
La propagación vegetativa de los eucaliptos tiene gran importancia en su mejoramiento para asegurar ganancias genéticas inmediatas. Los clones superiores de eucaliptos seleccionados cuidadosamente a partir de poblaciones naturales o mejoradas, pueden ser propagados masivamente a bajo costo. Posteriormente, los rametos de esos clones seleccionados podrán ser utilizados directamente en plantaciones para asegurar que las características superiores de crecimiento sean retenidas (Vichnevetskaia, 1997). Esta tecnología está muy bien establecida en algunos países como Brasil, donde de la producción anual en viveros, es decir 175 millones de plantas, aproximadamente 30% proviene de estacas enraizadas.
La micropropagación de eucalipto se ha desarrollado en más de 55 especies, y en un gran número de híbridos, utilizando técnicas convencionales de organogénesis a partir de tejidos juveniles como cotiledones y embriones, y de árboles adultos empleando brotes epicórmicos, nudos y rebrotes como fuente de explantes (Jones y van Staden, 1997). La aplicación a escala comercial de estas técnicas se ha visto limitada por factores tales como las bajas tasas de multiplicación, calidad de los explantes, y altos costos ocasionados por el uso intensivo de mano de obra en las etapas de multiplicación y enraizamiento (McComb y Bennett, 1986).
La automatización de una o más etapas en los procesos de micropropagación es una opción para la reducción de costos de manipulación, reducción del espacio, e incrementar volúmenes de producción. La utilización de medios de cultivo líquidos es una condición para lograr desarrollar esta alternativa (Aitken-Christie et al., 1995; Kurata, 1995). Teisson et al. (1996) desarrollaron un equipo sencillo de inmersión temporal, cuyo nombre comercial es RITAÒ (récipient à immersion temporaire automatisé), el cual ha sido empleado para el cultivo de microesquejes y embriogénesis somática en varias especies de interés hortícola, con altas tasas de multiplicación, lo cual ha permitido disminuir los costos de producción y reducir riesgos de contaminaciones.
En Cuba, a partir del desarrollo del primer sistema semiautomatizado de inmersión temporal en 1997, se han realizado investigaciones sobre la aplicación de esta técnica en la proliferación de meristemas de caña de azúcar (Saccharum spp.) (Lorenzo et al., 1998), y micropropagación de piña (Ananas comosus) (Escalona et al., 1999).
El objetivo de la presente investigación fue evaluar algunos factores críticos del proceso como son la duración y frecuencias de inmersión, volumen óptimo de medio de cultivo por explante, y duración de las fases de proliferación y elongación que tiendan a optimizar la producción y calidad de los brotes de Eucalyptus grandis.
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