La resolución de un microscopio óptico se define como la distancia más corta entre dos puntos en un espécimen que se pueda todavía distinguir por el observador o el sistema de la cámara fotográfica como entidades separadas. La resolución es un valor algo subjetivo en microscopia óptica porque en la alta ampliación, una imagen se puede aparecer unsharp pero todavía resolver a la capacidad máxima del objetivo. La abertura numérica determina la energía de resolución de un objetivo, pero la resolución total del tren óptico del microscopio entero es también dependiente sobre la abertura numérica del condensador del substage. Cuanto más alta es la abertura numérica del sistema total, mejor es la resolución.
5.4.- CAMPO VISUAL
El diámetro del campo en un microscopio óptico es expresado por el número del campo visual , o simplemente el número del campo, que es el diámetro del campo de la visión en los milímetros medidos en el plano de imagen intermedio. En la mayoría de los casos, el diámetro de la abertura del diafragma del campo del ocular determina el tamaño de campo de la visión. El tamaño de campo en el plano del espécimen entonces se define como el número del campo dividido por la ampliación del objetivo :
Ampliación objetiva del ÷ del tamaño de campo = del número del campo
(fn) (M o)
Si una lente auxiliar se inserta entre el objetivo y el ocular, el factor de la ampliación de esta lente se debe también emplear en la ecuación por la multiplicación con la ampliación objetiva (antes de la operación de la división). Aunque el número del campo es limitado generalmente por el tamaño del diafragma de la ampliación y del campo (parada) del ocular, hay claramente un límite que también es impuesto por el diseño del sistema objetivo de la lente.
6.- MANEJO DEL MICROSCOPIO OPTICO Y MANTENIMIENTO
6.1.- MANEJO DEL MICROSCOPIO OPTICO
En el correcto empleo del microscopio óptico, se deben de seguir las siguientes pautas
Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
Para realizar el enfoque:
Ø Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
Ø Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.
Empleo del objetivo de inmersión:
Ø Bajar totalmente la platina.
Ø Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
Ø Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.
Ø Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
Ø Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
Ø Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
Ø Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
Ø Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
Ø Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
Ø Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.
6.2.- MANTENIMIENTO
Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).
El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.
Autor:
Cliffor Jerry Herrera Castrillo
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