Genética Forense (página 2)

Resultados

Figura 3 – Corrida en gel de poliacrilamira (5%)

Se realizaron tres corridas electroforéticas en geles de poliacrilamida (5%) para correr un total de 20 productos de PCR de individuos diferentes. De estas 20 muestras, 11 presentaron las bandas correspondientes al producto de amplificación del locus D1S80. Ademas de estas, se realizó una corrida electroforética en gel de azarosa, la cual no fue utilizada para analizar los resultados, ya que con los mismos fueron similares a los obtenidos en el gel de poliacrilamida teñido con plata.

Figura 4 – Corrida en gel de poliacrilamira (5%)

En las Figuras 3, 4 y 5 se presentan los geles de poliacrilamida, teñidos con sales de plata. En el gel correspondiente a la figura 3 se utilizó un marcador de peso molecular cuyas bandas corresponden a 1434bp, 1000bp, 900bp, 800bp, 700bp, 600bp, 500bp, 400bp, 300bp, 200bp y 100bp; mientras que los geles de las figuras 4 y 5 se utilizó un marcador de peso molecular con bandas correspondientes a 1444bp, 955bp, 736bp, 585bp, 476bp, 341bp, 258bp y 105bp.

Figura 5 – Corrida en gel de poliacrilamira (5%)

A partir de las distancias corridas por los fragmentos de DNAdc de peso conocido de los marcadores de peso molecular se realizó un gráfico del logaritmo del tamaño (Log(bp)) en función del la distancia recorrida desde el well (en mm). Luego se calculó la línea de tendencia para cada uno de los tres geles utilizados, eliminando los valores que se alejaban de la recta (Ver Figura 6).

Figura 6 – Relación entre el logaritmo del peso molecular de los MW y la distancia recorrida desde el well para cada uno de los tres geles utilizados.

Luego se midió la distancia entre el well y las bandas correspondientes a los amplicones para el D1S80 en cada uno de los individuos. Luego se calculó utilizando los datos de la regresión de la Figura 6, para cada uno de los tres geles, el peso molecular de las bandas y luego la cantidad de repeticiones de 16bp que hay en cada una de las bandas. Para el cálculo de las repeticiones se consideró que el locus D1S80 esta formado por una secuencia de 14bp, seguido por secuencias repetitivas de 16bp, tal como se describe en http://alfred.med.yale.edu/alfred/recordinfo.asp?UNID=LO000333J. Asimismo se restaron el tamaño de los primers (28 y 29bp respectivamente), ya que estos no corresponden a parte de las secuencias repetitivas.

En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos a partir de los aplicones del locus D180S del cromosoma 1 humano. En la misma se presentan para cada uno de los tres geles y para cada una de las calles; la distancia recorrida por cada uno de los amplicones, el logaritmo del peso molecular (en bp) calculado a partir de las regresiones, el tamaño de los amplicones (en bp) y la cantidad de repeticiones que cada uno de ellos posee. Se puede observar que solo hay dos individuos homocigotos para este sitio, que son aquellos que corresponden a la calle 6 del gel 1 y a la calle 8 del gel 2. Se encontró que estos individuos poseían 33 y 19 repeticiones respectivamente. La frecuencia de homocigosis fue entonces de 2 homogicotas/11individuos(fH=0,18). Luego se calculó la frecuencia alélica de cada uno de los alelos presentes en los individuos analizados. En los organismos que presentaban solo una banda, se consideró que eran homocigotas, como ya fue mencionado anteriormente. Con los análisis realizados no puede descartarse que los organismos hayan sufrido alguna deleción del locus D1S80, ni que sean haploides para el cromosoma 1.

Tabla 1 – Resultados obtenidos a partir de los geles de poliacrilamida utilizados para correr los amplicones del D1S80.

Figura 7 – Frecuencia alélica para cada uno de los alelos presentes en la muestra analizada. Nota: En los dos organismos que se presentó solo una banda, se los consideró homocigotos, y por lo tanto se consideró que dicho alelo se encontraba duplicado.

Discusión y Conclusiones:

A partir de las muestras de isopado bucal de 20 individuos se obtvieron productos de la amplificiación del locus D1S80 para solamente 11 de estos. Esta eficiencia en la extracción del DNA y la posterior PCR es baja, y se debe principalmente a deficiencias durante el trabajo de laboratorio. Asimismo se obtuvieron buenos resultados en general. La frecuencia de homocigosis encontrada a partir de los 11 individuos fue de 0,18; mientras que la frecuencia de homocigosis encontrada a partir de 1307 individuos de Argentina fue de 0,19 según http://alfred.med.yale.edu/alfred/hetgraph.asp?siteuid=SI000567S&cutoff=0.25. Por otra parte la frecuencia alélica pudo ser calculada para cada uno de los alelos presentes en las muestras, pero debido a la diferencia de individuos analizados, con la bibliografía ya mencionada, en la misma se encuentras una mucho mayor cantidad de alelos (que difieren en la cantidad de repeticiones) y las frecuencias de los alelos hallados en este trabajo es consecuentemente menor. Aún asi todas los alelos encontrados en este trabajo están dentro del rango de repeticiones encontradas en los trabajos previos.

El presente trabajo podría servir como para describir la población argentina, en función del locus D1S80, siempre y cuando se aumente la cantidad de organismos analizados, ya que el numero analizado no es representativo para la población de nuestro país. Asimismo el objetivo de dicho trabajo es netamente académico y no tuvo objetivos de descripción de la población en general.

Bibliografía

Strachan T. y Read A. (2003) Human molecular genetics 3. Tercera Edición. ISBN:0-8153-4182-2.

Ayelen Rapoport

Cátedra de Genética Humana

Septiembre de 2007