Estabilidad química del Parthenium hysterophorus, Linn (página 2)

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Estabilidad en fase sólida inicial.

La selección de estas técnicas se justifica por la posibilidad de identificar y cuantificar la partenina presente en el polvo en presencia de otros sesquiterpenlactonas y compuestos afines sin que estos constituyan interferencias (Tabla 1) (Fig. 1). Los resultados obtenidos fueron los siguientes:

• Análisis de las características organolépticas: La observación de las características organolépticas del polvo permitió comprobar que el mismo no sufrió alteraciones visuales, mantuvo su color y apariencia con respecto a la muestra que no fue sometida a las condiciones señaladas.
• Análisis Químico: Se determinó la concentración del componente principal a tiempo cero y a los tres meses de almacenamiento bajo las condiciones de evaluación de la estabilidad acelerada y de vida estante. (Tabla 1) (Fig. 1).

Tabla 1. Resultados de la concentración de partenina obtenidos mediante la HPLC.

Fig. 1. Cromatogramas obtenidos mediante HPLC al evaluar la influencia de las condiciones de almacenamiento del polvo.

Al realizar la comparación de ambas condiciones evaluadas a los 15 días, se aprecia una reducción significativa de la concentración de ingrediente activo en las muestras sometidas a 75 % de humedad relativa y un 40 ºC. La concentración de ingrediente activo experimenta una marcada disminución al desarrollarse la evaluación a los 30 días de almacenamiento bajo ambas situaciones experimentales, con una mayor incidencia de la segunda variante ensayada.

Se apreciaron diferencias significativas entre las condiciones evaluadas (30ºC/ 60% HR y 40ºC/ 75% HR) comparadas con la concentración del ingrediente activo a tiempo cero y entre ambas variantes, lo cual demuestra la incidencia más marcada de la segunda condición en la estabilidad química del principal componente presente en el polvo de la planta, donde se emplea una temperatura de 40ºC a una humedad relativa de 75%. El procesamiento estadístico de los resultados mediante el paquete estadístico Anova se refleja en la Tabla 2.

Tabla 2. Procesamiento estadístico de los resultados de la estabilidad en fase sólida inicial.

Multiple-Sample Comparison

Dependent variable: Concentraciones

Factor: Tiempos

Summary Statistics for Concentraciones

Tiempos Count Average Standard deviation Standard error Minimum

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T 0 8 2.79125 0.0756755 0.0267553 2.78

T1 8 2.34325 0.0616297 0.0217894 2.12

T2 7 2.19414 0.14221 0.0537505 1.96

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Total 23 1.32565 0.162588 0.0339019 0.92

Tiempos Maximum Coeff. of variation

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T 0 2.89 5.14362%

T1 2.4 4.61214%

T2 2.33 12.3969%

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Total 2.89 12.2647%

ANOVA Table for Concentraciones by Tiempos

Analysis of Variance

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Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value

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Between groups 0.393547 2 .196774 20.93 0.0000

Within groups 0.188018 20 .00940089

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Total (Corr.) 0.581565 22

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Variance Check

Cochran's C test: 0.726552 P-Value = 0.0117475

Levene's test: 5.31078 P-Value = 0.0135981

▲ Control microbiológico: El análisis microbiológico realizados evidenció menos de 10 ufc/mL, valor que se mantuvo durante el tiempo de estudio (tres meses). Este valor se encuentra por debajo del límite establecido para preparaciones internas, pues se plantea que no deben existir más de 10³ ufc/mL al analizar bacterias (European Pharmacopeia). Se consideró el sólido pulverulento apto para su uso desde el punto de vista microbiológico.

Estudio de estabilidad. Condiciones de estrés

Atendiendo a la incidencia de factores tales como la temperatura, humedad y luz en la estabilidad química del sólido pulverulento, evaluada en los estudios de estabilidad en fase sólida inicial, se evaluó el polvo sometido a estrés de humedad. El sólido pulverulento almacenado en frascos protegidos de la luz, sin tapa y expuestos a una temperatura de 25 oC y 80 % HR (Fig.13), muestra una disminución marcada en la altura del pico correspondiente a la partenina, lo que evidencia la existencia de diferencias significativas con relación a la concentración de este ingrediente activo en el material vegetal. El análisis de dicha condición de almacenamiento nos permitió analizar la incidencia de la humedad como factor independiente al controlar otros factores tales como la temperatura y la luz. Lo anteriormente planteado nos permite concluir que la humedad es un factor que afecta la estabilidad del componente principal, caracterizada por una degradación que no supera el 10 %. Se realizó la evaluación química de la partenina bajo las condiciones de análisis establecidas en comparación con la determinación del componente principal en la muestra inicial. (Tabla 3) (Fig 11). Considerando los resultados de trabajos previos desarrollados con el sólido pulverulento del Phartenium histerophorus, Linn y con el objetivo de tener criterios acerca de la estabilidad química de la partenina en el mismo se desarrolló un estudio de estabilidad acelerada y de vida de estante según se describe en las ICH (2003) a muestras conservadas en envases que controlan la incidencia de factores que aceleran su degradación (Frasco de vidrio de color ámbar con tapón de goma protegidos de la luz con papel de aluminio). Análisis de las características organolépticas. Durante el tiempo de estudio transcurrido en cada una de las condiciones de almacenamiento, no se observó ningún cambio significativo en el color, olor y el aspecto de los sólidos pulverulentos.

Análisis químico. Al cabo de tres meses de mantener al sólido pulverulento en condiciones de envejecimiento natural y aceleradas la concentración de partenina muestra una disminución significativa en ambas condiciones, que alcanza valores de degradación que no rebasan el 10 % para la condición de 30° C y 60 % de HR (vida de estante) y que es superior al 10 % en la condición acelerada (Tablas 3 ) y (Fig. 11 y 12). Existen diferencias significativas entre las variantes analizadas en comparación con la concentración de partenina en la muestra inicial, además se evidenciaron diferencias significativas al comparar las condiciones analizadas entre si (Tabla 4). Estos resultados

ponen de manifiesto la inestabilidad química de la partenina en el sólido pulverulento de Parthenium hysterophorus, Linn, en las condiciones de almacenamiento empleadas en este estudio, y la necesidad de evaluar alternativas que incluyan la vías para disminuir el porcentaje de humedad del sólido pulverulento y condiciones de almacenamiento que favorezcan la estabilización. Por otra parte, los resultados que se muestran en la Tabla 3 muestran que la temperatura de almacenamiento es uno de los factores que más acelera la degradación química de la partenina.

Tabla. 3. Valores del % del ingrediente principal sin degradar (partenina) en las muestras de análisis.

Fig. 13. Cromatograma HPLC obtenido para la muestra de análisis bajo las condiciones experimentales establecidas: 25°C ± 2°C/80% ± 5HR en frasco destapado protegido de la luz.

Autor:

Msc. Yanelis Saucedo Hdez

Lic. Bassam Mohamad Safa

Dra. Mirtha Mayra González Bedia

Dr. Dr. Luis Ramón Bravo Sánchez

Dra. Elisa Jorge Rodríguez

Tec. Adalberto Quintana

Téc. Ana Hernández Monzón

Universidad Central de las Villas. Departamento Farmacia. Facultad de Química Farmacia. Cuba.