Producción in vitro de embriones bovinos: suplementación de los medios de cultivo con suero

• Sistema de producción in vitro de embriones
• Cultivo embrionario
• I. fuente de energía
• II. Fuente de proteína
• Bibliografía

SUMMARY: Techniques for producing bovine preimplantation embryos by in vitro maturation and fertilization, offers the potential for a large number of embryos at low cost to be used for basic scientific research (embryo development, transgenesis, cloning) or for commercial purposes. Embryo culture conditions can influence in vitro embryo development significantly, provoking deviations responsible for low quality compared with in vivo counterparts. In particular, serum supplementation alters both embryo morphology and quality and eliminating serum from the media could be beneficial to produce good quality embryos for cryopreservation and embryo transfer. The objectives of this review are to describe the general aspects of in vitro embryo culture and summerize some hypotheses about the way serum could alter embryo development and quality.

Key words: in vitro production, serum, embryo quality.

RESUMEN: Las técnicas para producir embriones bovinos, en estadios de preimplantación mediante la maduración de ovocitos y su posterior fertilización in vitro, ofrece la posibilidad de obtener embriones a bajo costo para ser utilizados con fines de estudio (desarrollo embrionario temprano, transgénesis, clonación) o con propósitos comerciales. Las condiciones de cultivo in vitro pueden influenciar significativamente el desarrollo embrionario, determinando cambios responsables de su menor calidad, comparados con los embriones producidos in vivo . En particular, la adición de suero a los medios de cultivo altera tanto la morfología embrionaria como su calidad, y su eliminación posibilitaría producir embriones de buena calidad para ser criopreservados y transferidos. Los objetivos de esta revisión son describir los aspectos generales del cultivo in vitro de embriones y resumir algunas hipótesis referidas a los mecanismos por los cuales el suero podría alterar el desarrollo y la calidad embrionaria.

Palabras clave: producción in vitro, suero, calidad embrionaria.

INTRODUCCIÓN

Durante muchos años se ha trabajado buscando reproducir artificialmente los eventos de la maduración y fertilización ovocitaria, y el desarrollo embrionario temprano. Así, lo que en principio sólo tenía fines de investigación, en los últimos años se ha comenzado a utilizar con propósitos comerciales.

Los resultados de producción in vitro de embriones en distintas especies fueron mejorando significativamente a medida que avanzaron los conocimientos acerca de sus requerimientos. Para ello, fue necesario transformar los medios de cultivo primitivos, muy complejos y suplementados frecuentemente con suero, en medios más definidos, en los cuales cada uno de sus componentes pudiera ser estudiado en función del efecto que genera sobre el desarrollo embrionario, su sobrevida poscriopreservación, la tasa de gestación y el porcentaje de crías viables.

SISTEMA DE PRODUCCION IN VITRO DE EMBRIONES.

El proceso de producción in vitro de embriones bovinos puede dividirse en tres pasos fundamentales, los cuales, independientemente del protocolo utilizado, en orden cronológico son: Maduración de ovocitos, Fecundación de ovocitos maduros, Cultivo de embriones.

Estos tres pasos, comprenden una compleja serie de procesos fisiológicos, muchos de los cuales son aún desconocidos, condicionando cada uno per se el éxito o el fracaso del siguiente. Luego de la maduración in vitro, aproximadamente el 90% de los ovocitos inmaduros puestos a cultivar, alcanzan la metafase II y expulsan el primer cuerpo polar entre las 16 y 24 hs de comenzada la maduración. De estos, aproximadamente el 80% es fecundado y comienzan a dividirse, al menos, hasta el estadio de 2 a 4 células. Sin embargo, sólo un 25-40% alcanza el estadio de blastocisto (B) o blastocisto expandido (Bex) luego del cultivo durante 6-7 días. Esto indica que el cultivo embrionario, correspondiente al paso más prolongado dentro del proceso de producción in vitro, es el período en el que se establece el mayor porcentajes de pérdidas del sistema. A su vez, durante esta etapa, se define en gran medida la calidad de los embriones obtenidos (Enrigh y col 2000, Rizos y col 2002, Galli y col 2003, Lonergan y col 2003, Lonergan y col 2004).