Interacción Antígeno ? Anticuerpo
Enviado por Fabián Shalóm
Inmunodifusión y Análisis Inmunoelectroforético
Introducción
En este práctico se realizaron dos técnicas, las cuales se basan en la interacción antígeno anticuerpo.
Inmunodifusión Doble de Ouchterlony
Por medio de la Inmunodifusión Doble de Ouchterlony se pueden realizar análisis cuali y cuantitativos de antígenos y anticuerpos en una solución, mediante una inmunoprecipitación en gel de agarosa.
Cabe destacar que existen dos tipos de inmunodifusión, doble o simple; en la inmunodifusión simple se mantiene fijo el antígeno o el anticuerpo; en la inmunodifusión doble, ambos, antigeno y anticuerpo, están libres para difundir (de forma radial o lineal) hacia el otro y formar un precipitado.
La técnica consiste en colocar en una placa de petri con gel de agarosa distintas soluciones de Ag/Ac y se las deja difundir libremente; en la región donde los gradientes de difusión se encuentran en proporciones de equivalencia se forma un precipitado que se visualiza como una banda opaca en el gel.
La precipitación ocurre, debido a la formación de complejos antígeno-anticuerpo en una proporción justa en la cual se forma una gran matriz de agregados (punto de equivalencia), por lo cual precipitan dando bandas.
Diferentes preparaciones que contienen múltiples antígenos frente a un antisuero multiespecífico dará numerosas bandas de precipitado debido a que las distintas interacciones entre Ag-Ac tienen distintos puntos de equivalencia, de esta forma se pueden analizar la complejidad de distintas mezclas antigénicas. Este patrón de bandas se puede clasificar de tres maneras: identidad parcial, total o no identidad y se muestra en la Figura 1.
Figura 1
Análisis Inmunoelectroforético
En esta técnica se utilizan simultáneamente tres técnicas; por un lado separación por electroforesis, difusión y precipitación de proteínas, esto le confiere a la técnica una gran sensibilidad, permitiendo el estudio de muestras complejas como sueros o muestras de orina.
La inmunoelectroforésis se lleva a cabo sobre un soporte sólido el cual no interfiera con la corrida de las proteínas, estas migran en la electroforesis por su carga neta. Se siembra la muestra a analizar en un reservorio en la placa y en un canal paralelo a la dirección de migración se siembra el inmunosuero especifico para el antígeno de interés, se los deja correr y luego pueden visualizarse las bandas de precipitación.
La especificidad y sensibilidad de las reacciones de precipitación permiten distinguir sustancias de movilidades electroforéticas idénticas dado que cada antígeno reacciona separadamente con su anticuerpo homólogo dando un arco independiente.
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