Selección de Aislamientos de Hongos Entomopatógenos para el Control de Huevos de la Polilla del Tomate, Tuta absoluta Meyrick (Lepidoptera: gelechiidae)

• Introducción
• Materiales y métodos
• Resultados y discusión
• Conclusiones
• Literatura citada

ABSTRACT: A pathogenicity study of 64 Metarhizium anisopliae var. anisopliae and 70 Beauveria bassiana isolates against tomato moth Tuta absoluta eggs, was carried out under laboratory conditions. The first evaluation was accomplished by spraying suspensions of 107 conidias mL-1 of each isolate directly on eggs, through a Potter tower. Mortality and conidia production on the eggs were significantly higher with the isolates M. anisopliae Qu-M558 and B. bassiana Qu-B911, Qu-B912 and Qu-B928. These isolates were newly evaluated using increasing conidia concentrations (0 to 108 conidia mL-1) of each of the five selected isolates. The isolates Qu-B912 and Qu-M558 produced the highest mortality percentages based on the area under mortality progress curve for each concentration, 80 and 60%, respectively.

Key words: biological control, insect pathology, tomato moth.

RESUMEN: Se realizó un estudio en laboratorio sobre la patogenicidad de 64 aislamientos de Metarhizium anisopliae var. anisopliae y 70 de Beauveria bassiana, en huevos de polilla del tomate Tuta absoluta. La primera evaluación se realizó por aplicación directa de suspensiones de 107 conidias mL-1 para cada aislamiento, con el sistema de pulverización de la torre de Potter. La mortalidad y esporulación sobre huevos fueron significativamente mayores con los aislamientos M. anisopliae Qu-M558 y B. bassiana Qu-B911, Qu-B912 y Qu-B928. Estos aislamientos fueron evaluados nuevamente en suspensiones crecientes de 0 a 108 conidias mL-1. Los aislamientos Qu-M558 y Qu-B912, produjeron los mayores porcentajes de mortalidad sobre la base del cálculo del área bajo la curva del progreso de mortalidad de huevos, 80 y 60%, respectivamente.

Palabras clave: control biológico, polilla del tomate, patología de insectos.

INTRODUCCIÓN

En el desarrollo del control biológico, los hongos entomopatógenos son los primeros agentes biológicos en ser utilizados como control de plagas. Estos microorganismos pueden infectar a los insectos directamente, a través de la penetración de la cutícula, y ejercen múltiples mecanismos de acción, confiriéndoles una alta capacidad para evitar que el hospedero desarrolle resistencia (Samson et al., 1988; Alves, 1998).

Más de 90 géneros y 700 especies incluyendo subespecies, patotipos, cepas y aislamientos de hongos, son conocidos por afectar los insectos (Bielikova et al., 2002). Las especies más estudiadas y utilizadas en el mundo corresponden a Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. y Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok, evaluándose en diversos órdenes de insectos, incluyendo plagas de lepidópteros de importancia económica presentes en Chile, como: Phthorimaea operculella, Pieris brassicae, Dalaca pallens y Rhyacionia buoliana (Hafez et al., 1994; Thomsen y Eilenberg, 2000; Cisternas et al., 2002; Gerding et al., 2002).

En plagas como la polilla del tomate, Tuta absoluta (Meyrick), el control de larvas se ve dificultado porque se alimentan del mesófilo de las hojas o penetran en los frutos, quedando protegidas de la acción de patógenos (Larraín, 1992). Una alternativa a este problema es el control de los huevos, los que son ovipuestos sobre la epidermis de hojas, tallos y frutos de la planta (Larraín, 1992), quedando expuestos a la acción de enemigos naturales. Además, su control evita la eclosión de larvas y el daño provocado en las plantas.

De acuerdo a lo anterior, se realizó un estudio en laboratorio para evaluar la patogenicidad de 134 aislamientos de los hongos entomopatógenos (HEP) Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana, pertenecientes a la colección del Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIA), Centro Regional de Investigación (CRI) Quilamapu, sobre huevos de la polilla del tomate Tuta absoluta, de manera de establecer una estrategia de control alternativa a las ya existentes.

MATERIALES Y MÉTODOS

Obtención de huevos

Las crianzas artificiales de polillas utilizadas en este estudio se realizaron en los laboratorios de entomología de. Instituto de Investigaciones Agropecuarias (INIA), Centro Regional de Investigación (CRI) Quilamapu, Chillán. Adultos de T. absoluta se mantuvieron en jaulas cubiertas con malla antiáfido, usando como sustrato para la ovipostura hojas de tomate (Lycopersicon esculentum) con los pecíolos inmersos en agua destilada para mantener su turgencia (Rodrigues et al., 1999).

Origen del inóculo

Los aislamientos de M. anisopliae y B. bassiana provinieron de la colección de HEP perteneciente al Programa de Control Biológico del CRI Quilamapu de INIA, y de una colecta de suelos realizada en lugares poco intervenidos y aledaños a huertos comerciales de tomate de la zona de Quillota, V Región (32º56’ lat. Sur; 71º14’ long. Oeste). Para extraer hongos desde las muestras de suelo se utilizó el método del cebado descrito por Goettel e Inglish (1997), utilizando larvas de la polilla de la cera (Galleria melonella L.).

Los aislamientos utilizados se produjeron mediante siembras en placas Petri, con agar papa dextrosa, y se incubaron a 25ºC hasta la esporulación del hongo. Las conidias se cosecharon desde la superficie del cultivo, realizando una suspensión en agua destilada estéril más 1% de humectante Tween 80 al 0,1%, y se llevaron a un agitador mecánico para disgregar las conidias. La concentración de conidias se determinó utilizando una cámara de recuento Neubauer (BOECO, Neubauer, Germany).

Pruebas de patogenicidad

Huevos colectados de las crianzas se traspasaron con una aguja humedecida a folíolos de tomate desinfectados con hipoclorito de sodio al 0,05% por 1 min y posteriormente se lavaron con agua destilada estéril. Para evitar la deshidratación, el ápice basal del folíolo se envolvió con algodón hidrófilo humedecido con agua destilada. Sobre cada folíolo se colocaron 10 huevos de T. absoluta. El inóculo consistió de una suspensión de 107 conidias mL-1, aplicada sobre los huevos mediante una torre de pulverización Potter. Como control se utilizaron huevos tratados con una solución de agua destilada con Tween 80. Los huevos inoculados se incubaron junto con las hojas en placas Petri y se mantuvieron a 20°C  con ciclos de 12 h de luz y oscuridad.

El diseño experimental utilizado fue completamente al azar con 134 aislamientos (70 B. bassiana y 64 M. anisopliae) con dos repeticiones por aislamiento, utilizando 10 huevos como unidad experimental. La emergencia de larvas y la micosis sobre los huevos se evaluaron diariamente desde el primer día de tratados. Los huevos sin eclosión de larvas se trasladaron a cámaras húmedas y se incubaron a 20°C para observar el posible desarrollo de micelio y conidias.

Los resultados obtenidos se compararon utilizando test de Chi cuadrado múltiple sobre tablas de contingencia de 2 x 2 (Gomez y Gomez, 1984), en base a la hipótesis que la proporción de huevos muertos vs. huevos vivos es igual para cada tratamiento.