y al final de la asignación … (Gp:) 2D COSY 2D TOCSY (Gp:) I (Gp:) F (Gp:) V (Gp:) F (Gp:) F (Gp:) F (Gp:) K (Gp:) K (Gp:) K (Gp:) I (Gp:) I V F (Gp:) F I K (Gp:) 3 4 5 6 7 8 (Gp:) H- (Gp:) -OH (Gp:) K F I V F F I K F K 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 (Gp:) Asignación secuencial (Gp:) I V F (Gp:) 3 4 5 (Gp:) 1 2 3 (Gp:) K F I (Gp:) H-K1-F2-I3-V4-F5-F6-I7-K8-F9-K10-OH (Gp:) 6 7 8 (Gp:) F I K (Gp:) K F K (Gp:) 8 9 10 (Gp:) 2D NOESY 
RMN bidimensional Obtención de los espectros de COSY, TOCSY y NOESY. Asignación : determinar que Aa hay en los espectros Determinación de las distancias entre Aa Reconstrucción 3D
Determinación de las distancias entre Aa NOE ? distancias
NOEs intensos: 1.8 < rHH < 2.8 Å NOEs medios: 1.8 < rHH < 3.5 Å NOEs débiles: 1.8 < rHH < 5 Å (Gp:) H (Gp:) H (Gp:) H (Gp:) H (Gp:) H
RMN bidimensional Obtención de los espectros de COSY, TOCSY y NOESY. Asignación : determinar que Aa hay en los espectros Determinación de las distancias entre Aa Reconstrucción 3D
Reconstrucción 3D Secuencia proteína Coordenadas De los átomos de la proteína Longitudes y ángulos de enlace quiralidad, planaridad Interacciones no covalentes: van der Waals, electrostáticas, enlaces d’H límites de distancias entre 1H ángulos diedros puentes disulfuro restricciones experimentales (Gp:) geometría covalente
(Gp:) Estructura 3D
enlace Estructura de proteínas
enlace ángulo Estructura de proteínas
enlace dihedro ángulo Estructura de proteínas
enlace dihedro ángulo van der Waals Estructura de proteínas
enlace dihedro ángulo + – electrostático van der Waals Estructura de proteínas
puente de hidrógeno enlace dihedro ángulo + – electrostático van der Waals Estructura de proteínas
puente de hidrógeno (Gp:) enlace
(Gp:) dihedro
(Gp:) ángulo
+ – electrostático van der Waals (Gp:) NOE
Estructura de proteínas
Parámetros espectrales con información sobre la estructura secundaria de la proteína NOE Constantes de acoplamiento (J) Desplazamientos químicos (d) Velocidades de intercambio H D Coeficientes de temperatura
NOE: La irradiación sobre un núcleo produce variaciones en la resonancia en los núcleos vecinos. Condiciones: distancia < 5Å Saturación de la resonancia para igualar estados alfa y beta. Es el método de elucidación de características estructurales en 3D y estereoquímica, usando RMN junto con información de los acoplamientos escalares spin-spin.
Parámetros espectrales con información sobre la estructura secundaria de la proteína
Constantes de acoplamiento spin-spin (J): Las interacciones escalares entre núcleos unidos a través de un pequeño número de enlaces covalentes causan desacoplamiento en las señales de RMN. Dependen de la geometría de los enlaces que unen los spins nucleares.
Parámetros espectrales con información sobre la estructura secundaria de la proteína
Desplazamientos químicos (d): Los diferentes protones de una molécula presentan frecuencias de resonancia característica en función de su entorno químico.
Parámetros espectrales con información sobre la estructura secundaria de la proteína
Parámetros espectrales con información sobre la estructura secundaria de la proteína Velocidades de intercambio 1H 2H:
5. Coeficientes de temperatura: permite saber si se forman puentes de hidrógeno intramoleculares.
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